根皮素对小鼠免疫功能的影响及对自身免疫性肝炎模型小鼠的保护作用

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目的:研究根皮素对小鼠T细胞和巨噬细胞体外行为的影响,探讨其对自身免疫性肝炎模型小鼠的保护作用。方法:双色荧光抗体染色结合流式细胞术分析根皮素对多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)刺激下的小鼠T细胞CD69和CD25表达的影响;Fluo-4/AM染色分析根皮素对T细胞Ca2+离子内流的影响;CFDA-SE染色分析根皮素对ConA刺激的T细胞增殖的影响;PI染色法检测根皮素对T细胞细胞周期的影响;AnnexinV-FITC/PI检测根皮素对地塞米松(DEX)诱导的T细胞凋亡的影响;MTT法、Griess试剂盒检测法和荧光微球结合流式细胞术分别检测根皮素对LPS和IFN-γ共刺激的巨噬细胞增殖、NO释放和吞噬功能的影响;一次性尾静脉注射20 mg/Kg ConA建立稳定的自身免疫性肝炎(AIH)模型;以血清丙氨酸转移酶(ALT)水平、肝脏病理切片、脾脏指数和肝脏指数为指标评价根皮素对AIH模型小鼠的保护作用;MTT法、双色荧光抗体染色、calcein/Co2+染色和Griess试剂盒检测法分别分析根皮素对AIH模型小鼠T细胞增殖、活化、凋亡和血清NO水平的影响,以探讨其保护机制。结果:根皮素能够显著抑制ConA诱导的T细胞CD69和CD25的表达,且能够抑制T细胞Ca2+离子内流和细胞增殖,细胞增殖指数从1.41±0.13分别下降到1.34±0.16、1.19±0.12和1.07±0.06;细胞周期分析显示,根皮素能将T淋巴细胞阻滞在G0/G1期;同时根皮素可以促进DEX诱导的T细胞凋亡;根皮素能明显抑制LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞的增殖和NO的产生,并能显著抑制其吞噬微球的能力。一次性尾静脉注射20 mg/Kg ConA能够建立稳定的AIH模型,6 h脾脏指数达到峰值,10 h AIL和肝脏指数达到峰值;腹腔注射50mg/Kg根皮素能够显著降低模型小鼠的ALT、脾脏指数和肝脏指数;病理切片结果显示,根皮素治疗组的炎症细胞的侵润程度明显减轻;根皮素抑制模型小鼠T细胞增殖和活化,促进T细胞凋亡,并且能够降低血清NO的水平。结论:根皮素能够调控小鼠免疫系统,且对自身免疫性肝炎模型小鼠有较好的保护作用。
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