论文部分内容阅读
Musclin是一种由骨骼肌分泌的生物活性因子,初步研究表明该基因的表达受多种因素的影响,具有调节肌肉营养代谢的功能。目前有关Musclin基因的研究报道较少,其作用及机制尚未阐明,因此,利用过表达和RNAi沉默技术对Musclin基因的作用及机制进行深入研究具有重要的科学意义。试验一：将培养的小鼠C2C12成肌细胞分为以下四组：正常细胞组(对照组)、小鼠pcDNA3.1-Musclin真核表达载体组(过表达组)、Musclin siRNA组(干扰组)、过表达与干扰siRNA共转染组(共转染组),进行细胞瞬时转染后检测了Musclin mRNA表达的变化并进一步检测了肌肉相关基因Smad3、Myostatin的mRNA表达。荧光定量PCR结果表明：与对照组Musclin mRNA的表达相比,过表达载体组极显著上调(p<0.01),干扰组显著下调,共转染组也显著上调(p<0.01)但介于过表达组和干扰组之间;肌肉相关基因Smad3、Myostatin的mRNA表达变化中,与对照组相比,共转染组中Smad3表达显著下降(p<0.01),在干扰组中,其表达有较明显的升高趋势而在过表达组中却差异不大；而Myostatin的表达在干扰组中显著下降(p<0.01),过表达组和对照组几乎一样,而共转染组则有较明显的升高趋势。综上所述,本试验成功地实现了Musclin基因的过表达和沉默效果,且表明Musclin基因表达的变化可以影响肌肉相关基因Smad3和Myostatin基因的表达,Musclin基因调节肌肉生长发育的作用途径可能与抑制Smad3基因表达和促进Myostatin基因表达有关。本试验为深入研究Musclin基因对骨骼肌生长发育和营养代谢的作用及其机制奠定了基础。试验二：为了进一步研究绵羊Musclin基因在骨骼肌营养代谢和生长发育中的作用和机制,根据本实验室利用生物信息学技术拼接出的绵羊Musclin cds区合成Musclin gBlocks DNA片段,克隆至T载体,经测序正确后进一步构建了绵羊pcDNA3.1(+)-Musclin真核表达载体,为后续深入研究奠定了基础。