针刺预处理对脑缺血再灌注大鼠血清皮质酮及其中枢受体的应变调控

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目的本课题在证实针刺预处理抗脑缺血再灌注损伤作用基础上,观察针刺预处理对脑缺血再灌注模型大鼠血清皮质酮(corticosterone,CORT)含量和脑糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达的调控作用及时间规律,探讨针刺预处理抗脑缺血再灌注损伤作用的可能机制。方法雄性Wistar大鼠168只,随机分成四组。正常对照组、针刺预处理组、脑缺血再灌注组、针刺预处理脑缺血再灌注组,每组大鼠42只。上述各组又分术后/针后0.5h、3h、6h、24h、48h各五个时段亚组,除48h亚组10只外,其余每亚组大鼠8只。采用上海产G6805针灸治疗仪行穴位电刺激,按一定方式对双侧肾俞、百会穴行针刺预处理,以通电10min,留针20min为一个针刺周期,连续重复4个针刺周期,共计2h。以颈动脉引流法行全脑缺血再灌注造模,术后/针后分0.5h、3h、6h、24h、48h五个时间段眼球取血,室温放置3h,3000r/min离心15分钟,取上清放入-70℃冰箱保存,免疫酶标法检测血清中皮质酮含量,同一批次样本于同一时间测定。4℃生理盐水、4℃4%多聚甲醛经左心室冲洗、灌注固定,4℃后固定过夜,25%蔗糖溶液4℃沉底,顶皮质1区脑组织常规电镜标本制片,透射电镜观察;恒冷箱冰冻连续冠状切片,免疫组化SABC法检测大鼠下丘脑、海马、大脑皮质等区GR的表达变化,运用HPIAS-1000高清晰彩色病理图文分析系统进行中枢GR免疫阳性物分析。结果1针刺预处理组及正常组神经元细胞核呈圆形,核膜完整,胞浆内含丰富的线粒体,粗面内质网清晰可见;脑缺血再灌注组核染色质边集,核膜厚薄不一,线粒体肿胀,内质网扩张;针刺预处理脑缺血再灌注组虽亦有染色质边集,线粒体肿胀及内质网扩张,但程度均较脑缺血再灌注组减轻。2针刺预处理组与正常对照组比较,0.5h血清皮质酮出现短暂升高(P<0.05),之后快速回落至正常水平。3脑缺血再灌注模型大鼠血清皮质酮含量在再灌注0.5h急剧升高,再灌注6h达高峰(P<0.05),24h后逐渐回落,但仍高于其它各组相应时间段(P<0.05),说明脑缺血再灌注损伤可导致血清皮质酮急剧升高且呈现一定的时间规律。4针刺预处理脑缺血再灌注组血清皮质酮含量与脑缺血再灌注组比较差异明显,各时段均低于脑缺血再灌注组,尤以6h最为显著(P<0.05)。说明肾俞、百会穴针刺预处理对大鼠脑缺血再灌注后血清皮质酮异常波动具有较强的干预作用。5脑缺血再灌注模型大鼠术后6h中枢GR表达明显减少(P<0.05),24h降到最低,48h后逐渐回升,但仍低于正常组相应时间段(P<0.05)说明脑缺血再灌注损伤可导致中枢受体显著降低且呈现一定的时间规律。6针刺预处理脑缺血再灌注组中枢GR表达与脑缺血再灌注组比较,6h、24h、48h均低于脑缺血再灌注组,尤以24h最为显著(P<0.05),说明肾俞、百会穴针刺预处理可下调脑缺血再灌注时顶皮质Ⅰ区Ⅴ层神经元GR的表达。结论1肾俞、百会穴针刺预处理可减轻脑缺血再灌注后神经元损伤;2调节血清CORT水平是其发挥神经保护作用的可能途径之一;3调节中枢GR表达是其发挥神经保护作用的重要方面。
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