生脉姜黄散对人鼻咽癌细胞放射增敏作用及其机制研究

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研究目的:通过生脉姜黄散对人鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤和人鼻咽癌细胞CNE-2的作用,确定生脉姜黄散对鼻咽癌放射治疗具有增敏作用。通过不同组中裸鼠移植瘤组织和不同分组的细胞中CDK6和CCND1等相关基因的表达差异,初步探讨生脉姜黄散对鼻咽癌增敏作用的相关分子机制。方法:1.高效液相色谱法检测生脉姜黄散中的主要成分2.人鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤模型的构建采用细胞悬液造模法,构建鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为7组,即空白对照组(生理盐水)、照射组、低剂量生脉姜黄散组(4.29g/kg)、高剂量生脉姜黄散组(12.87g/kg)、低剂量生脉姜黄散联合照射组(4.29g/kg)、高剂量生脉姜黄散联合照射组(12.87g/kg)、顺铂联合照射组(0.001g/kg),每组6只。检测并记录肿瘤的生长情况。HE染色观察各组肿瘤组织学特点。3.RT-qPCR检测各组肿瘤组织中CDK6和CCND1表达水平4.免疫印迹、免疫组化实验检测各组肿瘤组织中CDK6蛋白表达5.MTT试验检测生脉姜黄散对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖的抑制作用6.克隆形成试验检测生脉姜黄散对人鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用7.RT-qPCR检测各组细胞中CDK6、CDK4和CCND1表达将CNE-2细胞分成三组,分别为空白组、照射组和生脉姜黄散联合照射组,RT-qPCR检测各组细胞中CDK6、CDK4和CCND1表达。结果:1.通过高效液相图显示:生脉姜黄散组方的水提物分别含有人参皂苷Rb2、Rd、五味子酯甲、麦冬甲基黄烷酮A、五味子甲素。生脉姜黄散组方的醇提物含有五味子酯甲、五味子甲素、姜黄素。2.人鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤模型实验结果表明,与空白组比较,实验各组肿瘤生长均受到一定程度的抑制;与单纯照射组相比,高剂量生脉姜黄散联合照射组以及顺铂联合照射组肿瘤体积抑制率更高,肿瘤生长明显受到抑制,表明生脉姜黄散对鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤具有放射增敏作用。3.通过免疫印迹、免疫组化、体内外RT-qPCR实验结果显示,与空白组、照射组比较,生脉姜黄散联合照射组CDK6表达均上调(P<0.05)。体外RT-qPCR结果显示,对比照射组,生脉姜黄散联合照射组CCND1表达上调(P<0.05)。而对比空白组和照射组,生脉姜黄散联合照射组中CDK4表达无明显变化(P>0.05),以上结果说明,生脉姜黄散可以上调照射后CDK6和CCND1表达,对CDK4表达影响不明显。4.不同浓度的生脉姜黄散作用CNE-2细胞,细胞毒性在24h和48h时均呈浓度依赖性。其24h、48h半数抑制浓度(IC50)分别为10.04mg/mL、7.92mg/mL。5.克隆形成实验结果表明生脉姜黄散降低了受照射后的CNE-2细胞的克隆形成率。表明生脉姜黄散预处理可以明显提高鼻咽癌细胞的放射敏感性。结论:通过人鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤模型和克隆形成实验,证实生脉姜黄素散在体内外对鼻咽癌有放射增敏作用,其作用机制可能与CDK6和CCND1基因有关。
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