第一部分磷酸三钙调节巨噬细胞极化的机制研究研究目的:本部分主要针对磷酸三钙（Tricalcium phosphate,TCP）通过促进骨缺损修复现象,研究TCP通过巨噬细胞极化介导的成骨分化作用,并进一步探究Zeste同源增强子1（Enhancer of zeste homolog 1,EZH1）在TCP调节巨噬细胞极化中的机制。材料与方法:于体内构建大鼠股骨缺损模型,实验组于缺损处植入生物材料TCP,一天和八周分别取材,切片染色分别观察一天时材料周围巨噬细胞浸润情况及八周后TCP骨缺损修复情况。体外用TCP浸提液刺激人骨髓间充质干细胞（Human bone marrow stromal cells,h BMSCs）,检测其成骨向分化。TCP浸提液刺激贴壁后的Thp1,检测巨噬细胞极化情况,及EZH1表达情况。并用Thp1上清刺激人骨髓间充质干细胞,检测Thp1上清促进h BMSCs成骨向分化情况。并进一步用si RNA敲低EZH1再检测TCP对于巨噬细胞极化及其介导的人骨髓间充质干细胞成骨向分化的调节作用。随后使用NF-κB通路抑制剂抑制NF-κB通路活化,检测NF-κB通路与EZH1的相互作用以及对下游炎症信号诱导巨噬细胞极化的影响。实验结果:体内实验结果显示大鼠股骨缺损处填充的TCP旁有明显新骨形成,TCP周围有巨噬细胞浸润聚集。体外结果显示TCP浸提液能显著促进h BMSCs成骨向分化及巨噬细胞向利于后期组织修复的M2向极化,且成骨向分化作用在巨噬细胞介导下作用更为显著。本研究发现,组蛋白甲基转移酶EZH1在TCP刺激的Thp1中被大幅下调,表明EZH1可能参与了巨噬细胞极化,以及h BMSCs的成骨向分化。实验结果同时显示,在TCP浸提液的刺激下,NF-κB通路的激活受到抑制,表明EZH1和NF-κB途径之间存在相互作用。进一步研究结果显示,EZH1的下调能够诱导M2巨噬细胞极化,但并不会直接导致NF-κB通路的激活抑制。而随着NF-κB途径的抑制,EZH1的表达显著下调,表明EZH1的抑制作用受NF-κB途径的调节。结论:TCP可以通过抑制NF-κB通路的激活,进而下调EZH1的表达。EZH1的下调降低了巨噬细胞M1向标记基因的表达,升高了M2向标记基因的表达,进而构建了促炎症因子表达降低的微环境,利于组织再生及骨缺损的修复。这些发现揭示了表观遗传在免疫成骨方面的作用,为巨噬细胞极化和骨缺损修复微环境调控提供了新的思路。第二部分富血小板纤维蛋白调节巨噬细胞极化的研究研究目的:本部分主要目的是探讨富血小板纤维蛋白（Platelet-rich fibrin,PRF）对巨噬细胞增殖、迁移、极化的影响。材料与方法:利用固定角度和水平离心方案制备PRF,并对制备产物从外观、质量等方面进行评估。扫描电子显微镜下观察PRF纤维结果以观察纤维网络致密性。以全血为对照组,利用培养基制备PRF浸提液用于巨噬细胞Thp1的刺激,CCK8检测Thp1增殖情况,Transwell实验检测Thp1增殖情况,RT-PCR检测巨噬细胞M1、M2向表面标记物转录情况,以研究不同刺激下巨噬细胞增殖、迁移、极化的情况。实验结果:以水平离心方案制备的PRF重量更重,大小更大,纤维网络的致密性也更高,便于更多的细胞和细胞因子聚集。结果显示,PRF很好的促进了周围巨噬细胞的增殖和募集,能显著性诱导巨噬细胞向利于早期抗菌的M1向极化,而且与固定角度离心方案制备的PRF相比,水平离心方案制备的PRF在巨噬细胞的增殖和募集上潜力更大,也能更好的诱导巨噬细胞M1向极化。结论:本论文研究了富血小板纤维蛋白对巨噬细胞增殖,迁移和极化的影响,发现富血小板纤维蛋白可以显著促进巨噬细胞的增殖、迁移活动,并能在组织修复早期诱导巨噬细胞向微生物防御的M1向极化。PRF诱导巨噬细胞极化的细胞因子、转录因子或表观遗传修饰因子及具体机制仍有待进一步研究。