论文部分内容阅读
目的本研究旨在从突触水平探讨年龄和单眼形觉剥夺(MD)效应对视皮质突触传递长时程增强(LTP)的影响,以及研究天然药物A对MD成年大鼠视皮质突触传递效能影响及其相关分子机制,以期对弱视治疗提供参考。方法第一部分:健康Wistar大鼠48只分2组进行不同目的研究:①健康Wistar大鼠24只分为4组,每组6只,除正常外其余各组均于生后14天制作右眼MD模型,分组情况:正常P45天组、正常P90天组、MDP45天组、MDP90天组。采用细胞外记录技术观察各组视皮质Ⅱ/Ⅲ层突触传递长时程增强(LTP)诱发率,以及各组在高频刺激(HFS)刺激后,兴奋性突触后电位(EPSP)以及群峰电位(PS)的变化。②健康Wistar大鼠24只分成4组,每组6只,除正常外其余各组均于生后14天制作右眼MD模型,分组情况:正常P90天组,MDP90天高剂量给药组,MDP90天低剂量给药组,MDP90天对照组。正常组和MDP90天对照组分别侧脑室予人工脑脊液(ACSF)注入,高、低剂量组侧脑室分别给予100nmol·L-1,10nmol·L-1天然药物A,采用细胞外记录技术观察各组注药后10,30,60,90min对基础突触传递水平的影响。给药90分钟后,给予各组视皮质Ⅳ层高频刺激,观察药物对视皮质Ⅱ/Ⅲ层LTP诱导的影响。第二部分:健康Wistar大鼠24只分成4组,每组6只,除正常外其余各组均于生后14天制作右眼MD模型,分组情况:正常P90天组,MDP90天高剂量给药组,MDP90天低剂量给药组,MDP90天对照组。高、低剂量给药组于生后P90天侧脑室各予100,10nmol·L-1天然药物A注入,饲养一周后,深度麻醉后处死。采用逆转录PCR技术观察各组nNOSmRNA的表达。第三部分:分组情况和给药方式同上,采用免疫组织化学技术观察各组NMDAR1受体的表达。结果1.年龄和异常视觉经验(MD)对视皮质突触传递效能的影响:第一部分:①各组视皮质Ⅱ/Ⅲ层LTP诱发率正常P45天组最高(5/6),最低的为MDP90天组。②高频刺激后EPSP斜率和PS幅值不同时段与基础突触传递水平的比较:EPSP斜率和PS幅值在正常P45天组、正常P90天组HFS后0,30,60min提高显著(P<0.01)。同一时间点比较,HFS后30,60min各组EPSP斜率以及PS幅值与基础值之比,组间比较差异具有显著性(P<0.01)。2.天然药物A对MD成年大鼠视皮质突触传递效能的影响:第一部分:①不同浓度天然药物A对基础突触传递水平的影响:在MD对照组和正常组侧脑室给予ACSF后10,30,60,90minEPSP斜率和PS幅值并无明显变化,天然药物A 10nmol·L-1,100nmol·L-1随给药时间延长能提高EPSP斜率和PS幅值,高剂量组更具有显著性。②天然药物A 10,100 nmol·L-1对高频刺激诱导的Ⅱ/Ⅲ层LTP的影响:HFS后30,60min后,EPSP斜率和PS幅值MD高、低剂量给药组、正常组均高于MD对照组(P<0.01)。3.天然药物A对MD成年大鼠视皮质nNOSmRNA表达的影响:第二部分:MD组视皮质nNOSmRNA表达量与正常组相比明显下降(P<0.01)。天然药物A高剂量组能上调视皮质nNOSmRNA表达(P<0.05)。4.天然药物A对MD成年大鼠视皮质NMDA R1受体表达的影响:第三部分:MD组视皮质NMDA R1受体表达量与正常组相比明显下降(P<0.01)。天然药物A高剂量组能上调视皮质NMDA R1受体表达(P<0.05)。结论1.大鼠视皮质长时程增强(LTP)诱发呈视觉经验依赖性,MD可降低剥夺眼对侧视皮质LTP诱发率;视皮质兴奋性突触后电位(EPSP)斜率、群峰电位(PS)幅值对高频刺激的反应受年龄和异常视觉经验影响,年龄越大,以及视觉经验的异常(单眼形觉剥夺)会降低视皮质对高频刺激的反应。2.天然药物A侧脑室注药能提高MD成年大鼠视皮质Ⅱ/Ⅲ层基础突触传递水平,增强EPSP以及PS幅值,呈剂量依赖性加强HFS对视皮质Ⅱ/ⅢLTP的诱导,提高突触传递效能。3.天然药物A侧脑室注药能促进单眼形觉剥夺成年大鼠视皮质nNOSmRNA和NMDAR1受体的表达。