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[背景]口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinomas，oscc）是头颈部恶性肿瘤中发病率最高的恶性肿瘤，容易发生细胞侵袭和转移导致患者预后较差。尽管口腔鳞状细胞癌在临床诊断、临床治疗各个环节不断进步，但患者术后五年的存活率仍低于50%，这个数字在最近30年一直未得到有效的改变。研究表明，miRNA是肿瘤细胞发生发展的关键调节因子，通过配对目标基因的蛋白质编码基因，诱导mRNA的降解或者翻译的抑制，参与调控不同肿瘤细胞的进程。目前的研究发现， miRNA在口腔鳞状细胞癌发生和发展中扮演关键角色，但对于其具体的作用和机制尚未清楚。本课题应用HiSeq deep sequencing(高通量深度测序)的方法，对口腔鳞癌组织和配对的癌旁组织样本进行检测，参照miRBase和Genebank数据库，筛选口腔鳞癌中差异表达的miRNA和mRNA（差异表达miRNA的定义为：Fold-change>1或者Fold-change<-1，并且p-value<0.01；差异表达mRNA的定义为：FDR≤0.001且倍数差异在2倍及以上的基因），构建口腔鳞癌差异miRNA和mRNA表达谱，探讨他们在口腔鳞癌发生发展中的表达变化规律；从表达水平上分析了差异miRNA和mRNA在口腔鳞癌中的相关关系；应用Real-time PCR方法，检测mir-20a-5p、ODZ3和TCHH在口腔鳞癌组织和癌旁组织中的表达情况，对测序数据的可靠性和准确性进行验证。[目的]我们应用HiSeq deep sequencing(高通量深度测序)的方法，构建miRNA和mRNA表达谱，筛选出差异性表达的miRNA和mRNA；初步分析miRNA和mRNA差异性表达在口腔鳞癌中的意义；并且对口腔鳞癌中差异性表达的miRNA/mRNA进行对接分析研究。为进一步研究miRNA在口腔鳞癌中的作用和机制提供理论和实验依据。[方法]选取10例手术切除新鲜冻存的口腔鳞癌及其配对的癌旁正常组织，Trizol法提取总RNA，应用分光光度计测量RNA浓度；应用高通量测序技术，构建口腔鳞癌组织及其配对的癌旁正常组织miRNA/mRNA表达图谱并分析；通过生物信息学技术预测miRNA的靶基因；口腔鳞癌组织和配对的癌旁组织显著差异miRNA/mRNA表达谱的对接分析；应用Real-Time PCR验证差异表达的miRNA和mRNA在口腔鳞癌组织和癌旁组织中的表达情况。[结果]（1）应用HiSeq deep sequencing(高通量深度测序)的方法，分析了10对口腔鳞癌组织和配对的癌旁组织miRNA的表达情况，结合数据分析，我们对这些差异的miRNA在口腔鳞癌中的表达变化规律进行了总结分析，结果显示：有77个miRNA显著性差异表达，有24个miRNA表达下调，53个miRNA表达上调，提示这些miRNA与口腔鳞癌的发生密切相关。试验中发现：口腔鳞癌组织和癌旁组织中有19个和14个新miRNA未在miRBase数据库中注册。（2）应用HiSeq deep sequencing(高通量深度测序)的方法，分析了10对口腔鳞癌组织和配对的癌旁组织mRNA的表达情况，结合数据分析，我们对这些差异的mRNA在口腔鳞癌中的表达变化规律进行了总结分析，结果显示：在口腔鳞癌组织及其癌旁配对的正常组织中共发现14629个mRNA，其中，有1120个mRNA显著性表达上调，有178个mRNA显著性表达下调，提示这些mRNA的显著差异性表达与口腔鳞癌的发生密切相关。（3）通过对口腔鳞癌组织和配对的癌旁组织显著差异miRNA/mRNA表达谱的对接分析，我们发现：不同的miRNA，其对接的靶基因数目不一样，有可能为零，也有可能数量上千，例如：let-7c靶基因5301个；mir-17-5p靶基因6767个；mir-19a-3p靶基因7614个；mir-20a-5p靶基因为5865个，与之相反的是mir-184、mir-183-3p、mir-196a-5p等等靶基因确为零个；差异表达基因中对接的miRNA数目较多。受两种以上的miRNA的调控，例如：MAGEA11受let-7a-3p、let-7b-3p、let-7d-3p、let-7f-1-3p、let-7f-2-3p、mir-15a-5p、mir-16a-5p等12个miRNA的调控；COL1OA1受mir-24-1-5p、mir-26a-5p、let-7a-3p、let-7b-3p、let-7d-3p等11个miRNA的调控；EMR1受mir-17-3p、mir-19-3p、mir-19a-3p、mir-20a-3p、mir-25-3p、mir-26b-3p6个miRNA的调控；与此类似的mRNA还有ODZ3、BAALC、 LRRC17等等。以上这些基因的表达异常可能与miRNA的密切调控有关。在口腔鳞癌的发生发展中，调控差异基因表达的miRNA不尽相同，他们的表达机制也不近相同，可能以某个miRNA为主，多种miRNA共同参与为辅。（4）Real-Time PCR实验表明，mir-20a-5p、ODZ3和TCHH表达情况与测序结果相符，可见，测序数据是可信的。[结论]我们通过对同一批口腔鳞癌组织和配对的癌旁组织样本中显著差异的miRNA/mRNA动态表达谱的研究及对接分析，初步揭示了miRNA表达失调在口腔鳞癌中表达变化规律，进一步阐明了口腔鳞癌的发生发展的分子机制，为寻找有效的口腔鳞癌早期诊断及恶性进展的生物分子标志提供了充足的理论依据。