溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜Flt3和Flt3L表达的研究

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wwwzjs19890622
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目的:溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis, UC)是炎症性肠病(Inflammatory BowelDisease, IBD)的一种,该疾病主要侵及黏膜层和黏膜下层,其病因尚不十分清楚。近年来,肠黏膜中的树突状细胞(dendritic cell,DC)和调节性T细胞(regulatory Tcell, T reg)的作用是学者们研究的热点。现有的观点认为DC和T reg之间的免疫调节在溃疡性结肠炎的炎症反应过程中起重要作用,并认为Fms样络氨酸激酶3(Fms-like tyrosine kinase3,Flt3)及其配体(Flt3ligand,Flt3L)参与了UC炎症反应过程中DC和T reg之间的调节。因此本研究采用小鼠溃疡性结肠炎模型,观察小鼠溃疡性结肠炎模型组与正常组小鼠的一般状态、疾病活动指数、光镜下观察HE染色病理变化和结肠黏膜损伤情况,并从细胞水平检测小鼠结肠黏膜DC和T reg的表达,从基因水平和蛋白水平检测Flt3和Flt3L的表达,探讨DC和T reg及相关因子Flt3和Flt3L在溃疡性结肠炎发生、发展中所起的作用,为临床UC的治疗打下理论基础。方法:采用葡聚糖硫酸钠(DSS)自饮法建立动物模型,BALB/c雄性小鼠20只,体重约25g,随机分为2组,每组10只。正常组:予饮用蒸馏水;模型组:予自饮50g/L DSS溶液7天,观察小鼠的一般状态、记录疾病活动指数(diseaseactivity index,DAI),并于造模后第7天处死小鼠,记录结肠黏膜损伤指数(colonicmucosa damage index, CDMI),光镜下观察HE染色小鼠结肠黏膜病理学改变,流式细胞学技术检测小鼠结肠黏膜DC、T reg在细胞水平的表达变化,免疫组织化学染色方法检测小鼠结肠黏膜Flt3在蛋白水平的表达变化,ELISA方法检测小鼠血液中Flt3L在蛋白水平的表达变化,实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)方法检测小鼠结肠黏膜Flt3/Flt3L在基因水平的表达变化。结果:1.模型组小鼠DAI评分3.15±0.28、CMDI评分2.44±0.24与正常组DAI评分0.00±0.00、CMDI评分0.00±0.00比较均明显升高,差异性显著(P<0.05),提示小鼠溃疡性结肠炎模型成功。2.模型组小鼠结肠黏膜中DC占细胞百分率0.19±0.18%、 T reg占CD4+T的百分率4.11±2.14%与正常组小鼠结肠黏膜中DC占细胞百分率2.83±1.52%、 Treg占CD4+T的百分率14.02±1.73%比较均明显降低,有显著性差异(P<0.05)。3.模型组小鼠结肠黏膜中Flt3在蛋白水平上的表达量82.19±5.34较正常组Flt3的表达量31.66±2.31明显降低,有显著性差异(P<0.05)。4.模型组小鼠血液中Flt3L在蛋白水平的表达量为36.25±6.34pg/ml较正常组Flt3L表达量57.24±5.97pg/ml明显降低,有显著性差异(P<0.05)。5.模型组小鼠结肠黏膜中Flt3mRNA的表达量0.53±0.06、Flt3LmRNA的表达量0.10±0.18较正常组Flt3mRNA的表达量1.01±0.13、Flt3LmRNA的表达量1.01±0.25比较均明显降低,有显著性差异(P<0.05)。结论:在DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型中DC和T reg之间存在免疫调节失衡,而导致该失衡的原因是Flt3和Flt3L在DC和T reg之间所发挥的桥梁作用受损,最终导致溃疡性结肠炎的发生。
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