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研究背景 自第一次定向外源基因转染血管至今近10年过去了。基因治疗再狭窄未能取得突破性进展。目前主要困难和挑战包括载体的安全性、基因转移方法改良和寻找高效基因。合适的载体的条件应转染效率最大，而无益的宿主反应最少。质粒对靶细胞安全，但转染水平低，不适合只有在细胞中过度表达才具有活性效应的分子。然而，质粒介导的转基因，如基因产物在体内是高效能的细胞分泌分子，如VEGF，可取得明显的生物学效应，主要因为基因转染的效能被细胞旁分泌作用扩大。就载体的传输而言，大多数依赖于导管的基因转移方法，转染率低，要提高转染效率必须延长血管阻塞的时间，或同时结扎侧枝，临床上难以用于冠状动脉转基因治疗，“理想的转移方法”应该是载体能获得对动脉组织深层的和对称性的穿透能力。我们以前的研究表明，蛋白涂层支架携带腺病毒介导的尿激酶前体(Pro-UK)基因，在小型猪冠状动脉模型可明显抑制平滑肌细胞增生，减少再狭窄，蛋白涂层支架有可能成为有临床应用前景的基因局部传输工具。但腺病毒载体有较强的免疫活性，目前难以用于临床。为此，本研究应用蛋白涂层支架携带吸附强启动子的pcDNA3质粒，介导iNOS基因转染小型猪猪冠状动脉，探索其抑制支架处冠状动脉新生内膜增生的作用，评估实际应用的可行性。 第一部分 一氧化氮合酶基因质粒的提取、纯化、鉴定 使用GENE COMPANY去内毒素纯化质粒试剂盒，扩增、纯