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目的：制备大黄素纳米乳,进行工艺优化和质量评价；体外抗肿瘤实验探讨其对大肠癌 Caco-2 细胞的凋亡诱导作用。
方法：
(1)采用低能法制备纳米乳。非离子型表面活性剂选择聚氧乙烯醚(40)氢化蓖麻油(RH-40)、吐温 80(Tween80)、司盘 80(Span80),助表面活性剂选择无水乙醇、甘油、正丁醇、PEG400,油相选择 IPM、橄榄油、金龙鱼食用调和油。采用伪三元相图对处方进行初步筛选,星点设计-效应面法优化制备工艺,对空白乳基本性质进行考察。
(2)制备含药纳米乳,建立大黄素高效液相含量测定方法,对大黄素纳米乳的基本性质进行考察。
(3)将含药纳米乳作用于人大肠癌细胞株 Caco-2,MTT 法测定对大肠癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞凋亡和细胞周期的影响。
结果：
(1)根据筛选结果,吐温 80(Tween80)为表面活性剂、甘油为助表面活性剂、油 相 为 肉 豆 蔻 酸 异 丙 酯 (IPM)、 水 相 为 水 , 表 面 活 性 剂 和 油 相 比 例(S/O)8：1、表面活性剂和助表面活性剂的比值(Km)4：1、表面活性剂和水相的比值 0.20,最优处方组成 IPM：Tween80：甘油：水为 5：32：8：200。空白纳米乳平均粒径为 9.86±1.23 nm。高速离心试验表明,纳米乳经 6000 rpm, 30 min,无分层和絮凝；室温放置 3 个月保持澄清透明,纳米乳无分层和絮凝。大黄素纳米乳为球形,分布均匀,粒径在 1~100 nm 之间,平均粒径 9.92±2.28 nm。纳米乳经 6000 rpm 高速离心 30 min,无分层；室温放置 3 个月保持澄清透明,纳米乳无分层和絮凝。(2)采用反相高效液相法测定大黄素含量,色谱柱：Waters C18 柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(80：20)；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波 长 ：254 nm 。 回 归 方 程 ： Y=5.1×109X-2.4×105 , 大 黄 素 在2.1×10-7mg~1.05×10-6mg 内线性关系良好, r2=0.9992 ,平均回收率为98.6%, RSD 为 2.38,精密度试验 RSD 为 1.84。测得三批大黄素纳米中大黄素含量分别为 0.58mg/mL,0.59mg/mL,0.57mg/mL。(3)大黄素 40μg/mL 组、大黄素纳米乳 20μL 组作用 Caco-2 细胞 48 h 后,细胞形态学上出现明显的凋亡特征,细胞抑制率显著增加,G 0/G 1 期细胞所占比例显著增加, S 期、G2/M 期细胞数量显著减少。
结论：大黄素纳米乳制备工艺简单,性质稳定；大黄素纳米乳体外诱导Caco-2 细胞凋亡作用明显强于大黄素,使细胞周期阻滞于 G0/G1 期。