【摘 要】
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油料植物中黄曲霉污染是一项十分严重的问题,可能引起作物减产、收益损失和家畜及人类健康等问题,黄曲霉代谢产生的次级代谢物黄曲霉毒素（Aflatonxin）可以造成肝癌的发生和恶化。因此,在作物的种植、生长、收获、加工、运输等一系列过程中全面防治黄曲霉是减少黄曲霉污染必不可少的措施。文冠果作为一种新型的油料树种,其种子可用于食用油和生物柴油的生产,而对于文冠果植株生物防治黄曲霉侵染的研究相对较少。因此
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油料植物中黄曲霉污染是一项十分严重的问题,可能引起作物减产、收益损失和家畜及人类健康等问题,黄曲霉代谢产生的次级代谢物黄曲霉毒素（Aflatonxin）可以造成肝癌的发生和恶化。因此,在作物的种植、生长、收获、加工、运输等一系列过程中全面防治黄曲霉是减少黄曲霉污染必不可少的措施。文冠果作为一种新型的油料树种,其种子可用于食用油和生物柴油的生产,而对于文冠果植株生物防治黄曲霉侵染的研究相对较少。因此,本研究以油料树种文冠果植株上分离的黄曲霉拮抗菌株展开研究,通过筛选、鉴定、对其抑菌机制初探以及发酵条件优化等几个方面的试验,为油料植物生物防治黄曲霉污染提供理论指导。主要研究结果如下:1.分离并保存文冠果根、茎、叶、根际土、外围土五个部分的植物样本的细菌,建立文冠果植株细菌菌库。从细菌菌库的795株细菌中经PDA平板初筛和文冠果种子复筛试验,获得5株可以在文冠果种子上抑制黄曲霉的细菌菌株,16S r DNA鉴定结果表明,5株细菌中2株为解淀粉芽胞杆菌属（Bacillus amyloliquefaciens）,2株为瓦雷兹芽胞杆菌属（Bacillus velezensis）,1株为假单胞菌属（Pseudomonas sp.）。2.通过香豆素培养基进行选择性筛选,结合文冠果种子抑菌能力,得到拮抗细菌YS003,对该菌株展开16S r DNA鉴定、进化树构建、形态学观察、产水解酶能力检测及生理生化特性检测,确定其为一株瓦雷兹芽胞杆菌（Bacillus velezensis）。3.香豆素培养基筛选结果,推测菌株YS003可以抑制黄曲霉的生长并分解利用黄曲霉毒素。拮抗菌株YS003在文冠果种子表面定殖能力说明该菌株可能通过竞争生态位或形成生物保护膜的方式拮抗黄曲霉侵染文冠果种子。4.利用NCBI查找瓦雷兹芽胞杆菌合成脂肽类物质相关基因并设计引物,采用PCR技术对表面活性素（srf AA）、杆菌霉素D（bam A）基因进行DNA扩增,结果表明拮抗菌株YS003中具有脂肽类相关基因。5.为了使拮抗菌株YS003能够应用于生产研究,对其液态发酵条件进行了探究及优化,本研究以产芽胞量作为响应值,通过单因素试验和响应面试验确定了拮抗菌株YS003的最优发酵条件为:麸皮浓度1%、大豆粉浓度2.32%、Mg SO4·7H2O浓度0.06%,Ca Cl2浓度0.02%,Na H2PO4浓度0.2%,Na2HPO4浓度0.4%,初始p H 6.44,接种量5%。
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