纳洛酮对油酸型大鼠急性呼吸窘迫综合征的影响研究

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目的:探讨纳洛酮对油酸型大鼠急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome, ARDS)的作用机制。方法:将30只健康SD大鼠随机分为对照组、ARDS模型组和纳洛酮组(每组10只)。ARDS模型组:由股静脉缓慢注入0.1ml/kg的油酸,然后将生理盐水(4.0ml/kg)缓慢注射。纳洛酮组:注入油酸剂量和方法同上,然后由股静脉缓慢地注射1.0mg/kg纳洛酮(溶于4.0ml/kg生理盐水中)。对照组:由股静脉缓慢地注入4.1ml/kg生理盐水。3h后采集血液,离心后放入-40℃冰箱保存;取左肺叶称其湿重,70℃烘干后称其干重,计算左肺湿干重比值;右肺上叶放入-70℃冰箱冻存,,用4%甲醛液固定中叶,用PBS和3%戊二醛前后固定下叶;ELISA法测定血浆中p-内啡肽(p-endorphin,β-EP)及血清中心房钠尿肽(Atrial natriuretic peptide, ANP)、B型脑钠肽(B-type natriuretic peptide, BNP)含量;生化法测定肺组织中的Na+-K+-ATP酶(Na-K-adenosine triphosphatase, NKA);应用免疫组化染色法测定核转录因子-kB (nuclear factor kappa BNF-kB);制备电镜标本和光镜标本观察肺组织改变。结果:1.与对照组比较,ARDS模型组和纳洛酮组肺湿/干比重值升高,纳洛酮组与ARDS模型组比较肺湿/干比重值下降。2.与对照组比较,ARDS模型组血浆β-EP、ANP和BNP含量显著升高(p<0.01);与对照组比较,ARDS模型组肺组织中NF-kB核转位阳性率显著升高(p<0.01);肺组织中NKA含量显著下降(p<0.01);纳洛酮组各项指标与ARDS模型组比较有显著差异(p<0.01)。3.各项指标的相关性:血浆中β-EP、血清中ANP、BNP含量、肺组织中NF-kB转位阳性率、NKA的含量与左肺湿/干重比值存在相关性(p<0.01);β-EP、ANP、BNP含量与肺组织NF-kB转位阳性率存在相关性(p<0.01)。4.病理学观察结果光镜:对照组肺结构正常,无渗出和水肿;ARDS模型组肺泡萎缩,肺泡腔内见渗出性液,可见中性粒细胞和泡沫样细胞,部分处见透明膜,肺问质明显水肿、增厚,血管周围见套袖状水肿;纳洛酮组上述病变轻。电镜:对照组肺结构正常;ARDS模型组可见Ⅰ型肺泡上皮细胞及内皮细胞肿胀和坏死,Ⅱ型肺泡上皮细胞板层小体变性、破坏、排空现象,见大小不均的空泡,肺泡表面覆盖一层条索状物质,肺泡间隔增宽,肺泡腔内可见炎症细胞;纳洛酮组上述变化比较轻。免疫组织化学染色结果:对照组可见极少量NF-kB表达阳性细胞;ARDS模型组可见大鼠气管粘膜上皮和肺上皮细胞中NF-kB表达阳性的细胞增多:纳洛酮组细胞分布相似,但NF-kB表达阳性细胞较ARDS模型组减少。结论:1. ARDS早期,血浆p-EP、血清ANP、BNP、肺组织NF-kB核转位阳性率、NKA的含量与肺湿/干重量比值存在相关性,表明以上指标可间接反应肺水肿程度。2.血浆β-EP、血清ANP. BNP含量与肺组织NF-kB具有相关性,可影响肺部炎症反应。3.纳洛酮可抑制血浆β-EP、血清ANP、BNP的升高,阻断肺组织NF-κB的激活,提高NKA活性,减轻肺问质、肺泡水肿,肺组织坏死。
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