【摘 要】
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我们分别对该试验室分离得到的六个植物MARs(TM1,TM2,TM3,AM1,AM2,AM4)进行ARS(Autonomous Replicating Sequence)功能鉴定,发现TM1和AM4具有强的自主复制功能,而其他四个植
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我们分别对该试验室分离得到的六个植物MARs(TM1,TM2,TM3,AM1,AM2,AM4)进行ARS(Autonomous Replicating Sequence)功能鉴定,发现TM1和AM4具有强的自主复制功能,而其他四个植物MARs序列无ARS活性.为了进一步对酵母自主复制功能进行深入研究,利用PCR方法对TM1和AM4进行亚克隆,相应亚克隆分别命名为TM1-1、TM1-2、TM1-3、AM4-1、AM4-2和AM4-3.实验发现,TM1-3和AM4-3不仅具有比完整MARs更高的活性,而且在酵母转化效率、转化稳定性及生长速度方面也优于完整片段.为进一步证明具有ARS功能的MAR增强外源基因表达作用,我们将具有ARS功能的TM1和AM4以及具有ARS功能的亚克隆片段TM1-3和AM4-3分别插入植物表达载体pBI121中gus基因表达盒的两侧,通过转基因植株来检测这四个片段对gus基因表达的影响.实验结果表明,TM1、TM1-3、AM4、AM4-3分别使外源基因在烟草中稳定表达增强1.38倍、2.41倍、1.23倍和1.81倍,实验中发现尽管TM1,TM1-3,AM4,AM4-3可以使外源基因平均表达水平提高,但转基因个体之间的表达差异仍然存在.综上所述,我们可以通过对MAR的自主复制功能分析来筛选强DNA片段,并构建高效表达载体,利用该载体转化烟草可以使外源Gus基因在再生植株中的稳定表达活性提高,该研究不仅为基因工程产业化提供高效表达载体,而且也会有助于MAR作用机制的阐明.
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