CD16+单核细胞亚群与子痫前期病情严重程度的相关性研究

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子痫前期(Pre-eclampsia,PE)是威胁母婴生命的产科四大死亡疾病之一。目前,临床上用于监测PE病情严重程度的相关指标主要有肝肾功能测定、尿液检查及眼底检查。然而,这些指标中没有一个被证实有足够的敏感性或特异性来预测该疾病病情的进展。因此,仍期待更敏感、更特异的指标。  单核细胞是一类异质型的细胞群,已有研究证实循环中存在着执行不同功能的单核细胞亚群。目前,对人循环中单核细胞亚群的划分主要基于CD14和CD16流式细胞术分析。2010年国际免疫学会命名委员会将人类外周血中单核细胞分为三种类型:经典型(CD14++CD16-)、中间型(CD14++CD16+)和非经典型(CD14+CD16++)。中间型和非经典型单核细胞具有较高的活化炎症反应的潜能,又被统称为“促炎型”CD16+单核细胞;它们在多种炎症相关的疾病如冠心病、哮喘及I型糖尿病中数量明显增加,且与这些疾病的病情进展和不良预后呈正相关。  PE被认为是一种过度的炎症反应性疾病,目前尚无文献报道 CD16+单核细胞亚群在PE进程中的动态变化及与该疾病严重程度的相关性。因此,本研究以CD16+单核细胞亚群为研究靶标,以正常晚孕对象为对照,将 PE患者分为轻度 PE组和重度PE组。采用最新的人单核细胞亚群划分方法(基于CD14/CD16/HLA-DR流式细胞术),检测PE对象外周血中CD16+单核细胞亚群数量(包括其绝对数和百分比),了解该型细胞数量的变化是否与疾病严重程度有关;并进一步探索该细胞亚群在诊断和预测PE病情进展中的应用价值。这将有助于指导PE的治疗策略及终止妊娠时机,对降低围产期母胎死亡率和改善围生儿预后有重要意义。  第一部分、子痫前期患者循环中CD16+单核细胞亚群数量变化研究  目的:研究循环中CD16+单核细胞亚群(包括CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞和CD14+CD16++HLA-DR+非经典型单核细胞)百分比和绝对数在PE进展中的变化。  方法:以正常晚孕妇女为对照组,以PE患者为试验组,按病情轻重程度将其分为轻度PE组和重度PE组。分别采集正常晚孕妇女(n=30),轻度PE患者(n=15)和重度 PE患者(n=30)外周血(肝素抗凝),经红细胞裂解液裂解红细胞,采用三色荧光标记直接染色(APC-CD14、PE-CD16和FITC-HLA-DR单克隆抗体)和荧光计数微球流式细胞分析(FCM)技术,检测各组外周血中CD16+单核细胞亚群的百分比和绝对数。  结果:重度PE组患者外周血中CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞百分比高于轻度 PE组和对照组(P<0.01);而轻度 PE组、重度 PE组和对照组三组间CD14+CD16++HLA-DR+非经典型单核细胞百分比没有明显差异(P>0.05)。与对照组相比,重度PE组和轻度PE组患者外周血中CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞绝对数明显增加(P<0.01);且与轻度 PE组相比,重度 PE组患者CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞绝对数亦增加(P<0.05);与对照组相比,重度 PE组妇女 CD14+CD16++HLA-DR+非经典型单核细胞绝对数也明显升高(P<0.01)。  结论:循环中CD16+单核细胞亚群数量随着PE病情的进展明显增加,提示其在反映病情严重程度和疾病进展方面有一定的相关性。  第二部分、子痫前期患者CD16+单核细胞亚群数量与病情严重程度的相关性研究  目的:研究循环中CD16+单核细胞亚群百分比和绝对数与PE病情严重程度的相关性。  方法:根据第一部分实验结果,采用Spearman相关性分析法对PE患者外周血中CD16+单核细胞亚群百分比和绝对数与病情严重程度进行相关性分析。  结果:外周血中CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞百分比(r=0.447,P<0.01)和绝对数(r=0.332,P<0.05)均与PE病情的严重程度呈正相关。而外周血中CD14+CD16++HLA-DR+非经典型单核细胞百分比(r=-0.145,P>0.05)和绝对数(r=-0.174,P>0.05)与PE病情的严重程度无相关性。  结论:循环中CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞百分比和绝对数均与PE病情严重程度密切相关,其可作为临床监测PE病情进展的参考指标。  第三部分、CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞数量在子痫前期临床诊断和预测中的应用价值研究  目的:研究循环中CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞数量在PE中的诊断和预测的应用价值。  方法:根据第一部分实验结果和第二部分研究结论,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析和Logistic单元及多元回归分析来建立以循环中CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞数量作为诊断和预测PE的指标体系。  结果:通过ROC分析发现,外周血中CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞绝对数诊断PE的曲线下面积为0.8226,最佳的诊断阈值为56个/μl,其诊断PE的敏感度和特异度分别为62.2%和90.0%。进一步采用Logistic单元和多元回归分析显示,外周血中CD14++CD16+HLA-DR+中间型单核细胞绝对数和尿酸水平对PE具有重要的预测价值(P<0.01)。  结论:循环中CD14++CD16+HLA-DR+单核细胞绝对数和尿酸水平对PE具有较好的诊断和预测价值,可望作为临床诊断及预测PE的参考指标。但有待大样本前瞻性研究证实。
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