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由于金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus, S.aureus)耐药性菌株的出现及传播,使S.aureus感染的治疗无计可施,因此S.aureus疫苗研究备受关注。但研究表明,全菌体灭活苗、荚膜多糖苗或荚膜多糖结合苗、类毒素等免疫效果不理想,而菌体表面蛋白的免疫保护作用,成为近年S.aureus疫苗研究中较优的候选者。铁调节表面决定簇B(IsdB)是镶嵌在S.aureus表面的蛋白,并证明具有良好的免疫原性,但对具有免疫保护作用的其抗原表位尚不了解。本研究用IsdB免疫优势片段(129-361aa)——重组IsdB3免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤技术制备筛选出6株能够稳定分泌抗IsdB3蛋白抗体的细胞株,分别命名为2E1、2E3、3A7、3B6、3H5和4D3。通过Giemsa染色法观察,所得杂交瘤细胞染色体数约在80-96之间,符合融合细胞的染色体变化规律;对McAbs亚类进行检测,其中2E1、2E3和3H5的重链为IgGl型,3B6和4D3的重链为IgG2b型,而3A7的重链为IgG2a型,所有McAbs的轻链均为K链；在交义试验中,IsdB3与S.aureus的TRAP蛋白之间无交叉反应,说明所得的McAbs特异性良好;用Western blot检测6株杂交瘤细胞上清都能与IsdB3蛋白有特异性结合；以S.aureus全菌体作为包被抗原,用间接ELISA方法检测所得McAbs的反应原性,结果3A7、3B6和4D3可与S.aureus结合,而2E1、2E3和3H5与S.aureus不结合。根据IsdB3的结构设计5对引物,以S.aureus Newman株DNA为模板,经PCR扩增出isdB3a、isdB3b、isdB3c、isdB3d和isdB3e基因片段。这些基因片段编码的多肽表达后,分别与3A7、3B6和4D3McAbs进行Western blot分析,结果发现5种重组蛋白多肽均可以与这3株McAbs结合，初步表明重组IsdB3蛋白片段暴露于菌体表面的有效免疫抗原表位为模拟表位。以3B6株McAb为配基,从噬菌体随机七肽库中筛选抗体识别的模拟肽,对获得的与3B6株McAb反应的阳性噬菌体克隆,并对其进行测序及序列分析,结果也显示IsdB3蛋白的抗原表位为模拟表位。该研究为进一步研究S.aureus多抗原嵌合表位疫苗提供重要参考。