目的伤口长期迁延不愈在难治性慢性伤口治疗过程中普遍存在,因其极大的影响了患者的生活质量且难以治愈,给患者和医生都造成了很大的困扰。脉冲射频能量(PRFE)已逐渐被接受用于此类慢性伤口的治疗,并且在临床上取得了令人满意的疗效,但对其作用机制仍然缺乏深入的研究。本研究拟建立一个糖尿病小鼠伤口模型作为此类难治性伤口的代表,用PRFE干预其愈合过程,通过肉眼、显微镜下及免疫组化等不同层面的观察和分析,阐明PRFE的作用机制。方法取26只糖尿病小鼠,分为实验组和对照组,每组13例。在26例小鼠背部同一位置做大小一致的全层皮肤切口。实验组13例均使用脉冲射频能量治疗,一天两次,每次30分钟,对照组13例则使用不具有脉冲射频能量的设备进行相同的处理。定期对伤口的愈合情况进行观察,并采集图片,通过图像软件计算伤口面积大小,观察伤口的愈合速度、伤口边缘的上皮化与伤口的收缩情况。在实验第7、10、22及42天,处死部分小鼠,将其伤口及边缘皮肤取下,分别做H&E染色、马松染色观察伤口增殖情况；行Ki-67、CD31免疫组化染色,通过对染色增强细胞核计数和软件分析测定细胞增殖情况；做Collagen-I、α-SMA、TGF-β、PDGF-A、VEGF、b-FGF、FGF-7等因子PCR定量,分析胶原蛋白及各生长因子在基因水平的变化；并在电镜下观察离体胶原纤维的形成过程,判断离体条件下PRFE对胶原纤维的作用.结果与对照组相比,实验组小鼠伤口愈合的速度明显加快,特别是超过17天以后,其愈合速度显著高于对照组(p<0.05)。同时,加快实验组小鼠伤口愈合的主要因素为伤口收缩,而非上皮化。由切片观察发现,实验组小鼠伤口肉芽组织增长较对照组厚且密,在第22天时实验组小鼠伤口非上皮化处肉芽组织增厚明显多于对照组(p<0.05)。马松染色结果与H&E染色结果一致,实验组染色普遍较对照组深,同时发现实验组增厚的组织处有大量有序的胶原沉积。Ki-67核染色增强阳性结果显示,实验组小鼠伤口处皮肤细胞的增殖高于对照组,在伤口中部,第10天和第22天实验组细胞增殖分别高于对照组25%和45%,后者具有统计学意义(p<0.05)。CD31血管染色在实验组与对照组差别不具有统计学意义。通过对第22天组织的PCR定量分析,Collagen-I表达实验组显著高于对照组,且结果具有统计学意义(p<0.05),其余各生长因子实验组与对照组相比均有不同程度的上调,但其差异不具有统计学意义。离体培养的胶原纤维形成所需的时间,实验组明显短于对照组,且差异具有统计学意义(p<0.05),实验组的胶原排列较对照组整齐,但差异不具有统计学意义。上述结果互相印证,具有一致性。结论上述结果表明,脉冲射频能量可加快难治性慢性伤口的愈合速度。其机制主要是通过刺激细胞的增殖,肉芽组织的形成和胶原的沉积,促进伤口收缩,从而加快伤口的愈合。