【摘 要】
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人工授精技术在畜牧养殖中已经大规模普及,精液保存的重要性不言而喻。随着精液保存时间的延长,精子内活性氧自由基(ROS)会大量积累,过量的ROS会氧化损伤精子的结构和功能,进而影响精液品质。在实际生产中,为了减少过量ROS引起精子氧化应激反应,需要添加外源抗氧化剂提高精液的抗氧化能力。研究表明当归多糖、枸杞多糖和黄芪多糖都具有强抗氧化性,本试验比较了三种不同组成成分的绵羊精液低温稀释液,分别是以三羟
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人工授精技术在畜牧养殖中已经大规模普及,精液保存的重要性不言而喻。随着精液保存时间的延长,精子内活性氧自由基（ROS）会大量积累,过量的ROS会氧化损伤精子的结构和功能,进而影响精液品质。在实际生产中,为了减少过量ROS引起精子氧化应激反应,需要添加外源抗氧化剂提高精液的抗氧化能力。研究表明当归多糖、枸杞多糖和黄芪多糖都具有强抗氧化性,本试验比较了三种不同组成成分的绵羊精液低温稀释液,分别是以三羟甲基氨基甲烷（Tris）-卵黄-柠檬酸-葡萄糖为基础配方的“稀释液1”,以脱脂奶粉-大豆卵磷脂-果糖为基础配方的“稀释液2”,和以Tris-卵黄–柠檬酸-果糖为基础配方的“稀释液3”。筛选出保存效果最好的稀释液,然后在稀释液中添加不同浓度的当归多糖、枸杞多糖和黄芪多糖,运用计算机辅助精子分析系统（CASA）分析在4℃保存不同时间后的精子活力、运动性,利用染色法分析顶体完整率和线粒体完整性,并结合酶标仪检测脂质过氧化指标,总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）的含量,以此来探究三种中草药多糖对绵羊精液低温保存效果的影响。本研究主要获得以下结果:1比较了三种不同组成成分的绵羊精液低温稀释液,精液保存72 h时,“稀释液2”的保存效果最好。其总运动精子比例（TM）为64.01%,前向运动精子比例（PM）为51.36%,快速运动精子比例（RM）为35.60%,显著高于“稀释液1”稀释组（P<0.05）。精液保存168 h时,“稀释液3”的保存效果最好,其TM为54.91%、PM为43.27%、RM为19.73%、线粒体完整性68.03%,均显著高于“稀释液1”和“稀释液2”稀释组（P<0.05）,顶体完整率为60.55%显著高于“稀释液2”稀释组（P<0.05）。120 h时,“稀释液3”稀释组T-AOC为0.764 mmol/mgprot,显著高于“稀释液2”稀释组（P<0.05）,SOD为13.443 U/mgprot,显著高于“稀释液1”稀释组（P<0.05）,MDA为11.648 nmol/mgprot,显著低于“稀释液2”稀释组（P<0.05）。经对比选择,“稀释液3”保存效果最好,可作基础液以供后续试验使用。2“稀释液3”中当归多糖的最适添加浓度为2000 mg/L,精液低温保存168 h时,精子大部分指标大于其余各组,其TM为57.63%,PM为46.38%,RM为21.58%,顶体完整率为54.56%,均高于对照组。保存120 h,2000 mg/L组线粒体完整性显著高于对照组（46.36%vs 44.34%,P<0.05）,且精液保存24h、72 h、120 h时,测得其MDA均低于对照组。3适量的枸杞多糖可提高长时间低温保存精液的保存质量,枸杞多糖的最适添加浓度为200 mg/L。精液保存168 h时,200、400 mg/L枸杞多糖添加组TM、PM、以及VCL、VAP均高于对照组,其中200 mg/L枸杞多糖添加组保存效果最好,其TM为43.33%、PM为30.69%、RM为10.54%,均高于其它试验组,但差异不显著（P>0.05）。保存120 h时,顶体完整率为67.10%,线粒体完整性为63.70%,显著高于对照组（P<0.05）。4在“稀释液3”中加入黄芪多糖可提高精液低温保存后的运动性、顶体完整率,黄芪多糖最适添加浓度为400 mg/L。精液低温保存168 h,与对照组相比,400 mg/L黄芪多糖添加组显著提高精子TM、PM和顶体完整率,其TM为44.7%,PM为34.59%,顶体完整率为61.56%（P<0.05）。但对于线粒体完整性,黄芪多糖似乎不利于精子线粒体完整性,黄芪多糖添加组的线粒体完整性均低于对照组。由以上结论可知:在三种稀释液配方中,“稀释液3”低温保存效果最好,添加2000 mg/L当归多糖、200 mg/L枸杞多糖对低温保存的绵羊精子具有保护作用。
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