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本试验通过对梨S系矮化砧离体再生培养过程的研究,筛选出了直接诱导再生的适宜外殖体和诱导时期,提出了试管苗继代增殖、生根、驯化移栽和微嫁接的主要影响因子。建立了梨S系矮化砧组培快繁的技术体系。主要结果如下: 1.3月份的嫩芽(萌发芽)比休眠芽和4月~6月的茎尖诱导成功率高,1/3MS+6-BA1.0(mg/L,单位下同)+IBA0.2+GA31.0+蔗糖25g/L+琼脂6.5g/L适于外殖体初代培养。外殖体褐变与多酚氧化酶活力和总酚含量密切相关,PPO活力高峰出现在4月份,总酚含量和褐变率高峰出现在5月份。 2.MS+6-BA1.0+IBA0.2+GA30.1+蔗糖20g/L+琼脂6.5g/L适宜试管苗继代增殖培养,增殖系数随培养代数的增加而提高,10代以后进入分化高峰期,17代以后开始下降。控制培养基中6-BA浓度低于2.0mg/L和GA3浓度低于0.2mg/L及使用组培专用封口胶可以有效提高试管苗分化质量,防止玻璃化苗产生。 3.建立了S系矮化砧试管苗生根的技术体系。二步生根法优于一步生根法,首先必需选择充分幼化(12代以后)且生长健壮的试管苗,先在附加IBA2.0mg/L的ASH培养基中暗培养7~9d,以促进根原基的形成,然后转入无激素的ASH+蛭石培养基中光下进行根伸长培养。培养基中添加80~100mg/L间苯三酚可以明显促进IBA2.0mg/L对试管苗生根的诱导效果,单独施用间苯三酚不能诱导不定根发生。试管苗的生根率随继代培养代数的增加而提高。 4.环境条件是试管苗驯化移栽的关键因素。S系矮化砧试管苗移栽前需经闭口强光炼苗10d,然后移栽到蛭石基质中,湿度保持在90%~1006,以后逐渐通风和增加光照,30d后栽入营养钵中。驯化移栽的时期宜选在春季(4月~5月)。 5.经过生根培养基诱导而未生根的无根苗,在适宜的湿度(70%~75%)、温度(25℃)、光照(初期遮光)等环境条件下,嫁接到半木质化杜梨实生砧木上,可以得到较高的成活率。微嫁接技术进一步完善了S系矮化砧组培快繁技术体系。