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目的：本课题通过观察HIFU治疗小鼠H22肝癌后树突状细胞的变化，探讨HIFU治疗对DC的影响；在此基础上，用HIFU治疗后坏死肝癌组织中的HSP70-肽复合物在体外活化DC，并将与HSP70-肽复合物激活的DC作为肿瘤疫苗免疫同种小鼠，激活免疫系统，观察特异性抗肿瘤免疫应答，为阐明HIFU治疗后机体抗肿瘤免疫功能增强的机制提供实验室依据。 方法：(1)20只接种H22瘤C57BL／6J小鼠，随机分为HIFU组(n=10)及对照组(n=10)。HIFU组接受HIFU治疗，对照组同一时间假照治疗，HIFU机未开电源。14天后取脾细胞进行流式细胞仪检测，观察HIFU术后小鼠体内脾脏成熟DC细胞CD80／CD86、CD205／CD11c的表达。(2)50只C57BL／6J正常小鼠随机分为5组，隔日1次，共3次，皮下注射下述物质2×10~6／ml，0.05ml，A组RPMI1640液-DC疫苗、B组HSP70-S180-肽复合物-DC疫苗、C组H22肿瘤组织粗提物-DC疫苗、D组HIFU治疗后的H22肿瘤组织粗提物-DC疫苗、E组HSP70-H22-肽复合物-DC疫苗。第7天每组取10只小鼠脾脏分离淋巴细胞，MTT法检测对H22细胞毒作用； 重庆医科大学硕士学位论文并取脾淋巴细胞与H22共培养24小时上清液ELISA法检测TNF一a、INF一丫，(3)1 00只正常e57BL/6J小鼠，随机分为5组，背部皮下接种不同DC疫苗0.05ml，隔日1次，共3次，于末次免疫后7一10天背部皮下接种H22细胞1 x 105个/ml 0.o2ml。观察肿瘤发生率、肿瘤体积、转移发生率、生存曲线、生存率，MTT法观察DC疫苗体内激活T淋巴细胞成为CTL细胞后的细胞毒活性。 结果:(1)HIFU治疗组及荷瘤对照组成熟DC细胞CD80/C D86、CD205/CD 1 le的表达分别为4.03士1 .36%、2.02士0.83%;2.44士2.14%、1 .47士1 .12%，HIFU治疗组与荷瘤对照组有显著差异(P<0.05)。(2)A组RPMI 1 640液一DC疫苗、B组HSP7O一5 1 80一肤复合物一DC疫苗、C组H22肿瘤组织粗提物一DC疫苗、D组HIFU治疗后的H22肿瘤组织粗提物一DC疫苗、E组HSP70一H22一肤复合物一DC疫苗，免疫小鼠7天后的脾CTL细胞毒性分别为13 .14士2.67%、14.08士3.66%、29.87士3.64%、45.04士3.29%、57.08士5.02%，HIFU后H22粗提物组、HSP70一H22一肤复合物组均较其它三组有明显差异。ELIsA法检测A、B、C、D、E组免疫小鼠7天后脾Thl细胞活化时分泌的细胞因子TNF一a、INF一丫分别为1 2.64士s.46pg/ml、54.55士6.64Pg/ml、27.18士12.62Pg/ml、39.72士9.25Pg/ml53.9士7.76Pg/ml;82.15士13.15Pg/ml、258.06士ZI.12Pg/ml178.39士15.17Pg/ml、214.38士20.84Pg/ml、259.23士17.12pg/ml。结果于各组杀伤率一致。(3)A组一E组分别免疫正常小鼠9天后，接种 重庆医科大学硕士学位论文2xl06个H22肝癌细胞7天时的成瘤率分别为70%、80%、70%、20%、20%，35天时的转移率分别是70%、50%、60%、60%、30%，49天时的生存率分别是。、o、o、o、70%。接种2 xl06个H22肝癌细胞后9天取脾单个核细胞MTT法检测小鼠的脾CTL细胞毒性分别为11.50士2.37%、12.21土2.33%、22.69士2.90%、36.17士4.69%54.05士7.65%。 结论:(l)HIFU治疗后，可能与肿瘤坏死灶中肿瘤特异性抗原表达增加，能有效的刺激DC成熟。(2) HIFU治疗后，坏死灶中HSP7O一H22一肤复合物制备DC疫苗能够体内激活CTL和Thl细胞，使CTL细胞体外对同种肿瘤细胞发挥特异性杀伤活性，使活化Thl分泌TNF_a、INF_Y增多。(3)Hsp70一H22一肤复合物一DC一疫苗能够体内激活T淋巴细胞，使初始型T淋巴细胞活化成CTL细胞，体内发挥对同种肿瘤细胞特异性抗肿瘤免疫保护作用。