温度响应型基因载体的研究

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基因治疗作为治疗疾病的一种手段已经越来越多地引起人们的关注。在基因治疗中,具有高选择性和高转染性的基因载体的使用是十分重要的。因此,开发具有可控性和较高转染效率的智能基因载体就成为当前研究的热点。   本文通过自由基聚合的方法合成了阳离子接枝共聚物——聚(甲基丙烯酸N,N-二甲基氨基乙酯-co-(顺丁烯二酸酐-聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-甲基丙烯酸正丁酯)))(PDMNIB),并且探讨了PDMNIB与DNA分子间的相互作用以及PDMNIB/DNA复合物体外的细胞转染情况。PDMNIB是一种具有温度响应性的阳离子接枝共聚物,通过紫外分光光度计测得了该聚合物的临界溶液温度(LCST)在20℃左右。琼脂糖凝胶电泳实验发现PDMNIB能够很好的与DNA分子发生相互作用形成较为稳定的复合物,并且发现制备该复合物的最佳温度应该在PDMNIB的LCST以下。Zeta电位实验和动态光散射实验(DLS)进一步对该复合物的温度响应性进行了分析,并发现PDMNIB/DNA复合物的表面电荷和粒径大小能够被外界温度所调控,因而具有很好的温度响应性。通过利用在有血清和无血清条件下分别制备的PDMNIB/DNA复合物进行体外的细胞转染可以发现,由于温度的改变能够影响PDMNIB与DNA分子间的相互作用,因此,在适当时刻对细胞进行短暂的低温培养可以明显地提高细胞的基因转染效率,同时实现了温度可控的细胞转染。通过对PDMNIB这种新型温度响应性基因载体的研究,丰富了基因载体的研究领域并且为进一步开发具有高转染性和可控性的基因载体从而达到基因治疗奠定了基础。
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