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性控精液作为动物性别控制最重要的组成部分之一,对畜牧业的发展具有重要意义,高质量性控精液的生产,需要建立高效、准确的精液纯度评价方法。下载NCBI数据库中猪X、Y性染色体序列,通过序列BLAST比对,找出X、Y性染色体特有基因,对X、Y性染色体特有基因进行GO、KEEG分析;在已找到的X、Y特有基因中各随机挑选5个进行基因保守性分析,找出保守性比较高的X、Y性染色体特有基因用于后续试验;建立实时荧光定量PCR检测精液纯度的方法;采用不同比例的性控精液对检测方法的检测效果进行验证。主要结果如下:1.通过BLAST比对分析找到PLP、SYP、TLR等共计856个X染色体特有基因,SRY、AMELY、UTY等共计58个Y染色体特有基因。并对X、Y性染色体特有基因进行GO、KEEG分析,其中X特有基因PLP注释到基因上调、炎症反应、细胞膜等二级功能;Y特有基因SRY注释到性别分化、雄性性别决定、序列特异性DNA结合等二级功能。通过对X、Y性染色体特有基因保守性分析,挑选出保守性比较高的X特有基因PLP和Y染色体特有基因SRY用于后续试验。2.PLP基因系统发育树显示,猪与牛在亲缘关系上最近,与虹鳟鱼、黑腹果蝇在亲缘关系上关系最远;SRY基因系统发育树显示,牛与山羊、猪在亲缘关系上最近,牛和猪在亲缘关系上与小家鼠、褐家鼠关系最远。基因编码蛋白结构进行分析发现PLP基因存在多个跨膜结构域和PLP结构域,有多种剪接形式。SRY基因编码236个氨基酸,有HMG结构域和一个简单结构域,不存在跨膜结构域和信号肽。3.对牛X、Y特有基因PLP、SRY设计特异引物,构建含有PLP和SRY基因的质粒,把PLP和SRY质粒按照不同比例混合,即X:Y 1:20、1:10、1:5、1:1、5:1、10:1、20:1,进行实时荧光定量PCR,得到标准曲线,建立检测方法。对性控精液进行纯度检测,市售X分选精液检测平均纯度为90.73%(商标标注平均纯度91.67%),市售Y分选精液检测平均纯度为89.04%(商标标注平均纯度90.67%),市售未分选精液检测平均纯度为49.84%(理论平均纯度50%),经过对比,本研究建立的方法检测精液纯度与商标标注纯度差异不显著(P>0.05)。对市售X分选精液和Y分选精液DNA按照1:20、1:10、1:5、1:1、5:1、10:1、20:1比例混合,采用已建立的检测方法对混合精液进行纯度检测,混合精液检测纯度和理论值差异不显著。由以上研究结果可以得出以下结论:对猪性染色体做了生物信息学分析找出了X、Y染色体的特异基因,筛选性染色体特异基因建立了实时荧光定量PCR检测方法,检测准确度高,可用于性控精液纯度的评价。为今后开展动物性控精液精确检测和性别控制进一步研究奠定了基础。