藤茶黄酮提取物HPLC指纹图谱建立

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藤茶学名为显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand-Mazz)WT Wang,又名茅岩莓、甘露茶、白茶等,是葡萄科蛇葡萄属的一种野生木质藤本植物。主要分布于广东、云南、贵州、湖南、湖北、江西、福建等省区。有关实验表明藤茶具有治疗黄疸型肝炎、风热感冒、咽喉肿痛、清热解毒、祛风湿、强筋骨、消炎、镇痛保肝护肝等功效,因而近年来国内外对其开发研究非常活跃。文献表明藤茶含有大量的黄酮化合物,是目前发现的所有植物中黄酮含量最高的植物,其药用价值很高。湖南张家界是藤茶最大的产区之一,藤茶产业已具规模,从藤茶中提取黄酮化合物是藤茶综合开发利用的重要途径之一。本研究以张家界藤茶为研究对象,对藤茶中黄酮类化合物的提取工艺进行系统的研究,确定了工艺流程。以HPLC为工具,建立了张家界藤茶黄酮提取物HPLC指纹图谱,并对黄酮提取物的抑菌作用进行初步研究,主要研究结果如下:1.通过单因素试验和正交试验,优化藤茶中黄酮的加热回流提取工艺,确定最佳工艺参数。结果表明,提取温度对提取效率的影响显著,提取温度>料液比>回流次数>提取时间。最佳提取工艺参数为:提取温度100℃、提取时间为45min、液料比为100:1、回流次数为2次,提取得率为35.93%。2.建立张家界藤茶总黄酮提取物HPLC指纹图谱,其色谱条件为:色谱柱C18(4.6×250mm),检测波长270nm,柱温35℃,进样量20μL,流速1.0mL/min,以乙腈-10%冰醋酸为流动相的梯度洗脱。在此色谱条件下,藤茶提取物中各物质峰能够达到较好的分离,10批藤茶样品的相对峰面积比值误差在10%之内,表明工艺稳定、可行。3.藤茶黄酮提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、青霉、黑曲霉和啤酒酵母的抑菌实验结果显示,不同质量浓度的藤茶总黄酮提取物对供试的霉菌无明显的抑制作用,对酵母有一定程度的抑制作用,而对3种供试的细菌都有明显的抑制效果。对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度为0.33g/L,对金黄色葡萄球菌的抑菌浓度更低,小于0.17g/L,对酿酒酵母的最低抑菌浓度为1.29g/L。对枯草芽孢杆菌的最低杀菌浓度为1.29 g/L,对大肠杆菌和金黄色葡萄球的最低杀菌浓度分别是0.65 g/L和0.33 g/L,对酿酒酵母的最低杀菌浓度为2.58 g/L。
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