Bacillus subtilis NH的分离及玉米皮发酵参数的优化研究

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玉米皮是玉米加工玉米淀粉所得到的副产品,具有来源丰富,成本低廉的特点,是一种潜在的饲料资源,但其粗纤维含量高、适口性差、难于被动物消化利用。本试验旨在利用微生物发酵改善玉米皮营养价值和适口性,降低玉米皮中的粗纤维和霉菌毒素等的含量,增加饲料中的活菌数,提高玉米皮的利用价值。试验的内容与结果如下:1.产纤维素酶菌株的分离与鉴定。采用刚果红染色法分离产纤维素酶的菌株,并通过革兰氏染色法和16srDNA测序进行种属鉴定,并对其酶活进行测定。试验结果表明,分离获得了一株产纤维素酶的菌株,此菌株为革兰氏阳性菌;测序结果进行同源性比对,该片段的核苷酸序列分析结果表明,该菌株的16s rDNA核苷酸序列与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtils)的同源性为95%。命名为Bacillus subtils NH。纤维素酶活力测定的结果显示,Bacillus subtils NH的纤维素酶活性在24h时最高,达到0.533±0.207U/mL。2.玉米皮发酵的参数优化研究。试验用Bacillus subtils NH、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)和卷曲乳酸菌(Lactobacillus crispatus)3种益生菌等比例混合制备发酵菌剂。玉米皮、米糠、棉粕按20:3:3制备发酵底料,发酵采用室温固体发酵。为优化发酵参数,发酵试验分别以3%、5%、7%和9%的接种量接种发酵,检测不同的接种量对于发酵效果的影响;以30%、40%、50%、60%的料水比发酵,检测不同料水比对于发酵效果的影响;以1d、3d、5d和7d四个发酵时间进行发酵,检测不同发酵时间对于发酵效果的影响。检测指标包括营养成分含量、pH值、活菌数、霉菌毒素和感官评价等。试验结果表明,发酵参数优化中,以接菌量为自变量时,混合菌剂接种量为7%时发酵效果最好,活菌数达到43.00×108/g,NDF和ADF的值分别为41.5%和14.2%;以料水比为自变量时,料水比为50%时发酵效果最好,活菌数达到3.5×108/g,活菌数高于其他处理组,NDF和ADF的值分别达到38.5%和13.8%,比原料有明显降低;以发酵时间作为自变量时,发酵时间为7d时发酵效果最好,活菌数达到24.5×108/g,NDF和ADF的值分别达到38.5%和13.8%,比原料有明显降低。因此得出结论,在发酵玉米皮的参数优化中以接菌量为7%,料水比为50%,发酵时间为7d时,发酵效果最佳,且发酵后饲料气味、颜色、质地相比原料明显有所改善。除此之外,活菌数明显增加,纤维素酶活性、CP含量升高,干物质、NDF和ADF的含量及PH值均有所下降。以上结果表明通过对产纤维素酶菌株的分离鉴定及发酵玉米皮的参数优化,发现益生菌混合固体发酵玉米皮,能显著改善玉米皮的营养品质,提高其利用价值。
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