论文部分内容阅读
目的：检测具有EGFR突变临床特征的非小细胞肺癌患者EML4-ALK融合基因的发生率,分析其与临床特征的关系,为今后的非小细胞肺癌个体化治疗提供参考。材料和方法：1、在广西医科大学附属肿瘤医院标本库中共筛选出102例自2006年1月至2011年8月期间接受手术切除的新鲜非小细胞肺癌组织标本；入组的非小细胞肺癌患者均为中国人,且至少满足以下一个入组条件：女性、不吸烟／少吸烟和腺癌。2、通过参考文献,本研究选用3对不同的引物对EML4-ALK融合基因进行PCR扩增。首先采用RNA提取试剂盒对102例新鲜肿瘤组织标本进行总RNA的提取,后采用逆转录试剂盒将其逆转录成cDNA,再用单管多重逆转录聚合酶链反应(Multi plex RT-PCR)对cDNA进行扩增。最后将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,检测EML4-ALK融合基因的突变情况,并对在电泳中出现阳性条带的PCR产物进行直接测序,后将所测序列与EML4-ALK融合基因各亚型的已知序列进行比对,最终确定有无EML4-ALK融合基因的突变及突变类型。3、采用DNA提取试剂盒对EML4-ALK阳性标本进行DNA提取,后采用聚合酶链反应(PCR)对DNA进行扩增,再对PCR产物进行直接测序,以检测其EGFR(18-21号外显子)及KRAS(1、2号外显子)的突变情况。4、从年龄、性别、吸烟史、病理类型、临床分期这五个临床特征上对EML4-ALK阳性和阴性的非小细胞肺癌患者进行对比。5、数据资料用SPSS13.0统计软件进行统计分析,用连续较正X2检验(Continuity Correction x2Test)和Fisher精切概率法来(Fisher’s exact test)来比较EML4-ALK阳性和阴性病人临床特征之间的关系。所有p值均基于双向假设检验,p<0.05为有统计学差异。结果：1、102例非小细胞肺癌患者的总体年龄均数为58.79±9.93岁(30-80岁)；45例患者年龄低于总体年龄均数,占44.1%；57例患者年龄高于总体年龄均数,占55.9%。54例为男性,占52.9%；48例为女性,占47.1%。在吸烟史中,73例患者无吸烟史,占71.6%；29例患者有吸烟史,占28.4%。在病理类型的中,73例为腺癌,占71.6%；14例为鳞癌,占13.7%；14例为腺鳞癌,13.7%。1例为淋巴上皮瘤样癌,占1%。在临床分期中,34例患者为Ⅰ期,占33.3%；17例为Ⅱ期,占16.7%；40例患者为Ⅲ期,占39.2%；11例为Ⅳ期,占10.8%。2、102例非小细胞肺癌患者中,有8例(7.8%)存在EML4-ALK融合基因突变；其中7例为突变体1(V1),1例为突变体2(V2)。3、EML4-ALK融合基因阳性及阴性患者在年龄(p=0.47)、性别(p=0.20)、吸烟史(p=0.53)、病理类型(p=0.64)、临床分期(p=0.58)方面差别均无统计学差异。4、从8例EML4-ALK阳性患者的临床特征构成比来看,阳性患者多见于年轻(62.5%)、不吸烟(87.5%)、女性(75%)、腺癌(62.5%)的患者。5、8例EML4-ALK阳性患者的EGFR(18-21号外显子)及KRAS(1、2号外显子)均为野生型。结论：1、EML4-ALK融合基因代表了非小细胞肺癌的一个新的分子亚型,在经过基于EGFR突变临床特征筛选的非小细胞肺癌患者中其突变率比未经选择的人群稍高,这与文献的报道是相吻合的。2、EML4-ALK融合基因阳性多见于年轻、不吸烟、女性、腺癌患者,这为今后筛选EML4-ALK突变的潜在临床优势人群提供一定的参考依据。3、EML4-ALK融合基因突变与EGFR及KRAS基因突变是不共存的,这为规范非小细胞肺癌基因检测流程及实现以基因分型为基础的肿瘤个体化治疗提供理论依据和重要的参考。