FISH检测快速诊断曲霉菌感染的临床价值

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目的曲霉菌是自然界广泛存在的真菌,是引起侵袭性真菌感染(IFI)的主要病原菌。IFI多见于免疫受损人群,死亡率较高,而临床缺乏快速诊断方法,其实验室早期诊断至关重要。本研究旨在探讨荧光原位杂交技术(FISH)在检测系统性曲霉感染临床标本的可行性和特异性,以期早期诊断真菌感染。方法实验组为27例可疑真菌感染的福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片,阳性对照为标准曲霉菌,阴性对照为未感染曲霉菌的组织石蜡切片,空白对照是不加探针的标本切片。将石蜡切片进行二甲苯脱蜡、系列乙醇水化。以上分组采用经地高辛末端标记的与曲霉菌18S rRNA序列互补的18S-1寡核苷酸探针分别进行FISH检测,同时对组织石蜡切片进行HE及PAS染色。结果实验组中14例标本可见阳性杂交信号,杂交信号为绿色颗粒状荧光;13例未见杂交信号。阳性对照显示菌丝壁及菌丝内杂交信号呈绿色的颗粒状,呈局灶性或散在分布。阴性对照及空白对照未见杂交信号。HE及PAS染色可疑真菌感染分别为23例和27例,部分组织显示真菌的菌丝体,HE染色菌丝呈现红色,着色不良,PAS染色菌丝呈品红色,不能鉴定真菌种属。讨论本研究利用针对曲霉菌靶序列的探针特异地检测出组织石蜡切片中的曲霉菌,其阳性信号清晰可见,可确定曲霉菌感染,因此可根据不同种属曲霉菌设计出DNA序列特异性探针,明确各种曲霉菌种。而HE及PAS染色只能从形态学上观察真菌形态,易漏诊、误诊,更不能鉴别真菌菌种。在进一步的研究中有望应用该FISH方法快速检测各种临床标本中的真菌感染,可以作为IFI早期诊断的一种新策略,并协助合理选用抗真菌药物。
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