小鼠胚胎干细胞分泌物对秀丽隐杆线虫寿命的影响

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:songyc198610712
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目的:利用经典寿命研究模式生物-秀丽隐杆线虫,考察小鼠胚胎干细胞分泌物对秀丽隐杆线虫寿命的影响,并进一步筛选出具有延寿作用的miRNA。  方法:⑴利用野生型秀丽隐杆线虫评价小鼠胚胎干细胞培养液的延寿作用;⑵用体式显微镜观察并记录给予小鼠胚胎干细胞缺氧(2%O2,5%CO2,93% N2,24h)培养液后野生型秀丽隐杆线虫自体受精、身体运动和咽泵运动的情况,进而评价小鼠胚胎干细胞缺氧培养液对野生型秀丽隐杆线虫寿命相关指标的影响;⑶利用热应激和氧化应激实验考察小鼠胚胎干细胞缺氧培养液对野生型秀丽隐杆线虫快速应激反应的影响;⑷用抑菌实验和吸引实验评价小鼠胚胎干细胞缺氧培养液对野生型秀丽隐杆线虫饮食的影响;⑸运用real-time PCR技术检测经过轻度的缺氧预处理后,小鼠胚胎干细胞培养液中miRNAs的含量变化,及其在野生型秀丽隐杆线虫体内的表达情况;⑹通过饲喂的方法给予野生型秀丽隐杆线虫外源性的miR-210(ago-miR-210)后,观察并记录野生型秀丽隐杆线虫寿命的变化。  结果:①小鼠胚胎干细胞缺氧培养液相组较于对照组使野生型秀丽隐杆线虫寿命延长18.46%;②小鼠胚胎干细胞缺氧培养液对野生型秀丽隐杆线虫自体受精、咽泵运动没有明显的影响,但可延迟野生型秀丽隐杆线虫快速身体运动能力的丧失,主要延长野生型秀丽隐杆线虫生命周期的第二阶段和第四阶段;③小鼠胚胎干细胞缺氧培养液使野生型秀丽隐杆线虫快速应激反应的耐受性增强;④小鼠胚胎干细胞缺氧培养液对野生型秀丽隐杆线虫的饮食无影响;⑤real-time PCR技术检测发现小鼠胚胎干细胞缺氧培养液中miR-210的含量最高,并且在第4天和第8天的野生型秀丽隐杆线虫体内,miR-210的表达水平增加7倍左右;⑥通过饲喂的方法给予野生型秀丽隐杆线虫外源性的miR-210,使其寿命延长10.71%。  结论:小鼠胚胎干细胞缺氧分泌物使野生型秀丽隐杆线虫寿命延长;小鼠胚胎干细胞缺氧后释放miR-210,致培养基中miR-210含量增加,miR-210使野生型秀丽隐杆线虫寿命延长。
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