大蒜为百合科葱属(Allium Sativum L.)植物蒜的地下鳞茎。五千多年前,人们就利用大蒜防病。大量研究表明大蒜有降血脂,预防动脉硬化,防治冠心病,脑血栓,消炎杀菌,抗癌,延缓衰老等作用。蒜氨酸(S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜,alliin)是大蒜中含量最丰富的有机硫化物,并且非常稳定,它存在于大蒜的细胞质里;当细胞受损时,蒜氨酸酶从细胞液向细胞质释放,蒜氨酸和蒜氨酸酶接触被迅速转化为一系列新的化合物—大蒜辣素及其相似物,大蒜辣素(双烯丙基硫代亚磺酸酯,allicin)被认为是大蒜中最重要的活性成分,但它相当不稳定,易于自身反应。从鲜蒜中分别提取相对稳定的蒜酶及蒜氨酸,以高纯度蒜氨酸和蒜酶为原料药制成适当剂型,进入人体后释放大蒜辣素等功效成分,可成为真正的“高效大蒜新制剂”。《药品注册管理办法》及《化学药物研究技术指导原则》规定,注册?类新药需明确有效成分对照品的化学结构并对其质量进行研究。对照品系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质,对照品质量直接影响分析结果,因此对照品质量研究工作的系统性、科学性要求更高,我国的对照品是由中国药品生物制品所检定和分发。目前,国内外对蒜氨酸研究越来越热,但国内尚无法定的对照品供应,尽管美国已有药典对照品出售,但价格昂贵,每25mg L(-+)Alliin的价格为$1649,且国内购买不方便,鉴于大蒜药物制剂研发必需用蒜氨酸对照品参照,因此从事本课题研究。目的:优化蒜氨酸原料药(含量90%)的纯化工艺,确定最佳纯化条件,考察蒜氨酸熔点与含量关系;考察二次阳离子交换树脂纯化蒜氨酸原料药(含量90%)的工艺,并且与重结晶法进行比较,选择最佳纯化方法;制备高纯度蒜氨酸对照品并对其质量进行研究。方法:本实验采用重结晶的方法将含量30%～68%的蒜氨酸原料药纯化为含量90%的蒜氨酸。以结晶收率和结晶纯度为指标,分别考察结晶溶剂,溶剂体积,结晶温度,结晶pH值和干燥条件等因素对重结晶的影响,确定最佳结晶条件,用茚三酮方法考察阳离子交换树脂吸附蒜氨酸的时间,同时监测蒜氨酸被洗脱的程度,以蒜氨酸熔点和收率作指标,与重结晶工艺相比较,选择最佳纯化方法,并且以L-半胱氨酸计定量检测蒜氨酸原料药中总氨基酸的含量;分别用溶剂系统1和溶剂系统2重结晶制备高纯度蒜氨酸对照品,并且利用紫外,红外、质谱和核磁共振光谱分析技术确证其结构,采用微量旋光仪测定比旋度,结合文献数据确定立体构型,电子透射显微镜观察其显微结构,HPLC法测定蒜氨酸纯度。结果:选择重结晶法纯化蒜氨酸原料药(含量90%),最佳纯化条件:70%乙醇为溶剂,pH值4.8,水浴缓慢冷却降温至30℃静置结晶,结晶干燥条件为50℃真空干燥至恒重,当蒜氨酸含量达到85%以上时熔点与含量呈线性;选用两种溶剂系统成功制备出8.6g含量98%以上的高纯度蒜氨酸对照品,通过制备工艺稳定性考察,选择溶剂系统2制备蒜氨酸对照品,经过理化性质与结构确证,最终确定本课题所做产品为蒜氨酸对照品。结论:以30%～68%的中试蒜氨酸为制备原料,优选工艺,经一步重结晶得含量90%的蒜氨酸,作为有效成分可以申报Ⅰ类新药的原料。以90%的蒜氨酸为起始原料,优选两种溶剂系统,经两步重结晶获得高纯度蒜氨酸对照品。溶剂系统1得到蒜氨酸对照品含量99%,结晶收率≥20%;溶剂系统2得到蒜氨酸对照品含量≥99%,结晶收率25%。对照品制备工艺稳定,实现了批量制备,可作为新药研究及中试生产定性和定量测定的对照品。