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目的:
1.了解温州医学院附属第一医院临床分离大肠埃希菌的耐药情况及毒力因子的分布情况,探讨大肠埃希菌表达的毒力因子及其耐药性之间的关系。
2.分析温州医学院附属第一医院临床分离产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药情况,研究大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的不同基因型与所含的毒力因子的关系,为指导临床合理应用抗菌药物,提高抗菌药物治疗效率提供依据,也为ESBLs与毒力因子的相关性研究提供基础。
方法:
1.回顾性调查温州医学院附属第一医院临床分离大肠埃希菌的临床分布情况,VITEK60全自动微生物分析仪和K-B纸片扩散法检测大肠埃希菌对氨苄西林、环丙沙星、头孢曲松、呋喃妥因、亚胺培南、复方新诺明、妥布霉素、头孢吡肟、氨曲南、丁胺卡那、头孢唑啉、庆大霉素、左旋氧氟沙星、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦的耐药性。
2.PCR方法检测不同标本来源大肠埃希菌的毒力因子papC、sfa/foc、afa/dra、iutA、aer、fimH、hly、cnfl、kpsMTⅡ、fyuA。
3.纸片扩散确证法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),PCR方法检测ESBLs不同基因型的分布情况。
结果:
1.188株大肠埃希菌中,毒力基因iutA、fyuA、aer的检出率较高,分别为64.4%、60.6%和43.6%,imH的检出率为22.9%,sfa/foc、afa/dra、papc、KpsMTⅡ的检出率较低,均小于20%,hly、cnfl未检出。
2.尿液标本分离的大肠埃希菌中,毒力因子iutA、aer、fyuA、fimH的检出率分别为64.1%、54.7%、71.9%和39.1%,而毒力因子papc、sfa/foc、afa/dra、KpsMTⅡ的检出率均小于20%(分别为12.5%、6.3%、10.9%、1.6%):血液标本分离的大肠埃希菌中,毒力因子papc、iutA、aer、fyuA的检出率分别为22.5%、67.7%、21.0%和56.4%,而sfa/foc、afa/dra、KpsMTⅡ、fimH的检出率均小于20%;脓液标本分离的大肠埃希菌中,
3.188株大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率最高,达到88.8%;对环丙沙星、左旋氧氟沙星、庆大霉素、妥布霉素、复方新诺明、头孢类抗生素的耐药率也较高,均大于40%;对氨曲南的耐药率为36.2%;对呋喃妥因、亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、丁胺卡那霉素的耐药率较低。
4.氨苄西林的耐药性与毒力因子aer有关(P<0.05),喹诺酮类抗菌药物环丙沙星、左旋氧氟沙星的耐药性与毒力因子iutA有关,头孢唑啉的耐药性与afa/dra有关,庆大霉素的耐药性与aer有关,复方新诺明的耐药性与sfa/foc、iutA、aer有关,头孢他啶的耐药性与sfa/foc、iutA有关,氨苄西林/舒巴坦的耐药性与aer有关(P<0.05)。
5.产ESBLs大肠埃希菌的耐药率明显高于不产ESBLs大肠埃希菌。其中产ESBLs大肠埃希菌氨苄西林耐药率为100%;头孢曲松、头孢唑啉、头孢他啶均在90%以上;复方新诺明82.6%;环丙沙星、左旋氧氟沙星79.3%;庆大霉素77.1%。非产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率为70%;复方新诺明为58%。产ESBLs大肠埃希菌与非产ESBLs大肠埃希菌对亚胺培南及头孢吡肟、呋喃妥因耐药性低。
6.产ESBLs大肠埃希菌株中,毒力因子iutA、fyuA的检出率较高,均>50%;毒力因子fimH、aer的检出率为20%~40%,而毒力因子papC、sfa/foc、afa/dra和kpsMTⅡ的检出率均较低<20%;经x2检验产ESBLs菌株与非产ESBLs菌株的毒力因子分布率差异均无显著性(P>0.5)。
7.188株大肠埃希菌中ESBLs筛选试验阳性为92例,阳性率为48.9%,其中共检测到ESBLs基因阳性的有85株,检出率为92.4%。85株ESBLs基因阳性菌株中有64株携带CTX-M-9型基因,32株携带CTX-M-1型基因,23株携带TEM型基因,1株携带SHV型基因,其余基因均未检出。
8.92株产ESBLs大肠埃希菌中,毒力因子papC在CTX-M-9群中的阳性率要高于TEM群和CTX-M-1群,差异有显著性(P<0.05);毒力因子aer在CTX-M-1群中的阳性率要高于TEM群和CTX-M-9群,差异有显著性(P<0.05)。
9.CTX-M-9型在papC阳性株、aer阳性株、fyuA阳性株的检出率分别为50.0%、33.3%、36.8%,均高于其它ESBLs基因型。
结论:
1.毒力因子aer、fimH在不同标本来源大肠埃希菌中的检出率差异有显著性,且这两种毒力因子在尿液来源的大肠埃希菌中的表达率要高于血源性大肠埃希菌。证明Ⅰ型菌毛和产气杆菌素(aer)是UPEC关键的毒力因子,能介导尿路致病性大肠埃希菌黏附并侵入尿道和膀胱的上皮细胞,增强UPEC菌株的存活率。
2.抗菌药物的耐药性与某些毒力因子有关。对于某些毒力因子阳性的大肠埃希菌,其致病力更强,更难以清除,耐药情况可能更为严重,应引起临床关注。
3.我院CTX-M-9酶为主要流行ESBLs酶,各种毒力因子检出率与细菌是否产ESBLs无相关性。但ESBLs阳性菌株中不同的基因型与某些毒力因子的存在与否存在一定关系,毒力因子与产CTX-M酶大肠埃希菌耐药情况可能有关。可进一步深入研究毒力因子与大肠埃希菌耐药机制的关系。