兔骨髓间充质干细胞通过抑制NF-κB途径延缓髓核细胞退变

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目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)延缓髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)退变的机制。方法:取1月龄新西兰大白兔的髓核及双侧股骨和胫骨处骨髓进行NPCs及BMSCs的分离、培养及鉴定,实验分为三个培养组:单纯NPCs培养组,单纯BMSCs培养组,NPCs及BMSCs(1:1)共培养组。在培养的第3d、5d、7d、9d用CCK8法测定三组细胞增殖情况。在培养的不同时间点(5d,8d,11d,14d)RT-PCR(reversetranscriptase-polymerase chain reaction)检测三组蛋白聚糖、II型胶原、SOX-9的mRNA的表达变化;ELISA法检测三组TGF-βl的含量变化;Western-blot法检测三组NF-B的含量变化;并以免疫细胞化学染色鉴定三组细胞各时间点II型胶原的表达。结果:成功分离培养兔BMSCs及NPCs,BMSCs鉴定呈CD29~+、CD90~+、CD34~-。第3d起共培养组细胞增殖能力高于其他两组,且随培养时间的延长而增加。第11d起共培养组中SOX-9表达高于其余两组;第14d起共培养组中的蛋白聚糖及II型胶原的表达高于其余两组。第11d起共培养组TGF-βl含量较其余两组增高,而NF-B的含量较另外两组降低。结论:BMSCs与NPCs共培养后能促进NPCs蛋白聚糖、II型胶原、SOX-9的表达,延缓NPCs的退变,其机制主要是BMSCs通过上调TGF-βl从而抑制NF-B途径而实现的。
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