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目的:探讨抑制性受体TIGIT在系统性红斑狼疮SLE患者外周血CD3-CD56+NK细胞中的表达和临床意义,阐明该抑制性受体在SLE疾病发生和发展中的作用。方法:收集来自于南昌大学第一附属医院的44例SLE患者、21例疾病对照组类风湿关节炎RA患者和27例健康对照者HC外周血,同时记录各组病史、临床表现、体格检查、实验室检查结果、治疗方案和治疗反应。应用流式细胞技术检测各组CD3-CD56+NK细胞TIGIT表达水平,比较SLE组、RA组和HC组间NK细胞数量(占淋巴细胞的百分比和绝对数)以及NK细胞TIGIT表达水平,同时分析SLE患者外周血NK细胞TIGIT表达水平与炎性指标、疾病严重程度、自身抗体、SLEDAI评分、治疗的关系。并进一步分析TIGIT对SLE患者NK细胞功能的影响,分别用LPS和IL-12刺激SLE患者外周血PBMC 24h后检测NK细胞活化指标CD69、脱颗粒指标CD107a表达情况和细胞因子IFN-γ分泌情况,同时检测TIGIT阻断抗体阻断TIGIT表达后T淋巴细胞胞内细胞因子IFN-γ分泌水平。采用Graph Pad Prism5.0统计软件分析数据并绘图,对符合正态分布方差齐性的三组均数比较采用one-way ANOVA,用Student-Newman-Keuls进行两两比较,否则采用非参数检验,两组间比较采用t检验或者非参数检验,两个连续变量之间相关性采用两个连续变量之间相关性采用Pearson相关分析或者Spearman分析。对SLE患者治疗前后NK细胞TIGIT的变化及阻断TIGIT抗体前后的比较,采用配对t检验或Wilcoxon配对分析。结果:1、SLE组、RA疾病对照组和HC组外周血NK细胞数:HC组、RA疾病对照组、SLE组外周血CD3-CD56+NK细胞占总淋巴细胞的百分比分别为11.9±4.94%、7.85±6.41%和4.93%±4.45%;HC组、RA疾病对照组、SLE组外周血CD3-CD56+NK细胞绝对数分别为24.38±2.46(x107/L),12.91±4.35(x107/L),5.83±0.78(x107/L)。SLE患者外周血NK细胞所占淋巴细胞百分比和绝对数均显著低于健康对照者,差异有统计学意义(P<0.010;P<0.001),SLE组外周血NK细胞绝对数显著低于RA组,差异有统计学意义(P<0.010),但外周血NK细胞百分比在SLE组和RA组无差别(P>0.050)。RA组外周血NK细胞绝对数显著低于HC组,差异有统计学意义(P<0.010),但外周血NK细胞百分比在RA组和HC组无差别(P>0.050)。2、SLE组、RA组和HC组外周血NK细胞TIGIT的表达:HC组、RA组和SLE组NK细胞TIGIT表达比例的中位数分别为40.8%、28.5%、18.25%,平均荧光强度分别为8.71±2.77、6.51±1.98、7.50±2.19。SLE组较HC组NK细胞TIGIT表达比例和平均荧光强度均下降(P<0.050;P<0.050),但NK细胞TIGIT表达比例和平均荧光强度在SLE组和RA组间无明显差异(P>0.050);RA组较HC组NK细胞TIGIT表达平均荧光强度下降(P<0.010),但TIGIT表达比例在两者之间无差异(P>0.050);在HC组中,NK细胞TIGIT表达百分比和NK细胞占淋巴细胞百分比之间的Pearson相关分析r2=0.104,P=0.101,和NK细胞绝对数之间的Pearson相关分析r2=0.004,P=0.758;在RA组中,NK细胞TIGIT表达百分比和NK细胞所占百分比之间的Pearson相关分析r2=0.373,P=0.003,和NK细胞绝对数之间的Pearson相关分析r2=0.279,P=0.017;在SLE组中,NK细胞TIGIT表达百分比和NK细胞所占百分比之间的Pearson相关分析r2=0.219,P=0.001,和NK细胞绝对数之间的Pearson相关分析r2=0.599,P<0.001。3、SLE患者NK细胞TIGIT表达水平与炎性指标的关系:SLE患者低C3组和低C4组NK细胞TIGIT表达比例较正常C3和C4组显著下降(P=0.015;P=0.035),但在高Ig G、ESR、WBC组和相应正常组间无明显差异(P>0.050),NK细胞TIGIT表达平均荧光强度在SLE患者低C3、低C4组、高Ig G、高ESR、高WBC组以及相应正常组间无明显差异(P>0.050)。进一步将这些炎性相关指标与SLE患者外周血NK细胞TIGIT表达水平进行相关性分析,结果表明SLE患者外周血NK细胞TIGIT表达比例和C3呈正相关(r2=0.101,P=0.038),和C4不相关(r2=0.007,P=0.583)。另外,SLE患者外周血NK细胞TIGIT表达平均荧光强度和ESR、Ig G及WBC均无明显相关性(P>0.050)。4、SLE患者外周血NK细胞TIGIT表达水平与自身抗体的关系:SLE患者NK细胞TIGIT表达比例在抗r RNP阳性组中较抗r RNP阴性组中显著降低(P=0.022),但SLE患者NK细胞TIGIT表达百分比在其他自身抗体间(anti-ds DN A、anti-SSA、anti-SSB、anti-Ro52、anti-Sm、anti-n RNP/Sm、anti-Anu A抗体等)无明显差异,同时患者NK细胞TIGIT表达平均荧光强度在这些自身抗体间无明显差异。5、SLE患者外周血NK细胞TIGIT表达水平与疾病严重程度的关系:SLE活动组NK细胞TIGIT表达比例低于SLE稳定组(P=0.021),且SLE患者NK细胞TIGIT表达比例和SLEDAI评分呈负相关(r2=0.090,P=0.048),而NK细胞TIGIT表达平均荧光强度无差异性。进一步比较8例SLE患者治疗前后外周血NK细胞TIGIT表达水平,结果显示,经过一周的糖皮质激素和免疫抑制剂治疗后,SLE患者NK细胞TIGIT表达比例较治疗前明显上升(P=0.046)。同时比较了初诊和复诊SLE患者NK细胞TIGIT表达水平,虽然SLE初诊患者外周血NK细胞TIGIT表达水平低于复诊患者,但是差异未达到统计学意义(P=0.153)。另外,将SLE患者外周血NK细胞TIGIT表达水平和SLE患者的临床症状进行相关分析,如发热,皮肤表现(颊部红斑、盘状红斑和光过敏引起的皮疹)、口腔溃疡、脱发、关节炎、浆膜炎(胸腔积液和腹腔积液等)、神经病变、24小时蛋白尿、血尿、脓尿、白细胞减少、红细胞减少和血小板减少等,但均未发现明显相关性(P>0.050)。6、SLE患者外周血NK细胞TIGIT表达水平和SLE患者NK细胞活化和细胞因子分泌能力呈负相关:SLE患者外周血PBMC悬液经LPS刺激后,SLE患者TIGIT+NK细胞组较TIGIT-NK细胞组活化指标CD69表达下降(P=0.019),细胞脱颗粒表型指标CD107a表达降低(P=0.044),且CD69表达比例和TIGIT+NK细胞百分比呈负相关(r2=0.413,P=0.033),CD107a表达水平和TIGIT+NK细胞百分比无明显相关性(P=0.367)。SLE患者外周血PBMC悬液经IL-12刺激后,SLE患者TIGIT+NK细胞组较TIGIT-NK细胞组细胞因子IFN-γ分泌水平下降(P=0.014),IFN-γ分泌水平和TIGIT+NK细胞百分比呈负相关(r2=0.610,P=0.021)。进一步对17例SLE患者外周血PBMC分别采用抗TIGIT阻断抗体和抗人Ig G2B处理后,再经IL-12刺激后,结果发现相比抗人Ig G对照组,SLE组经TIGIT阻断后T淋巴细胞细胞因子IFN-γ分泌水平显著上升,差异有统计学意义(P=0.020)。结论:SLE患者外周血CD3-CD56+NK细胞TIGIT表达水平降低,存在天然免疫缺陷;SLE患者NK细胞TIGIT表达百分率与病情活动性和严重程度、糖皮质激素和免疫抑制剂治疗、自身抗体产生相关;TIGIT作为一种负性共刺激分子,可对SLE患者NK细胞的功能起到抑制作用。