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姜黄素(curcumin)是从姜科、天南星科植物根茎中提取的一种天然色素,最早作为食品添加剂用于食品加工行业。近年研究发现,它具备抗癌、抗自由基、消炎、医治耐药性结核病的作用,其防癌抗癌的作用已经引起医学界的广泛兴趣,有研究表明它能参与抑制多种肿瘤细胞的生长,并且具有明显的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。紫杉醇(paclitaxel)目前主要用于乳腺癌、卵巢癌的治疗,关于聚合微管蛋白,紫杉醇有强化作用,可以减弱肿瘤细胞的过度增殖,还可以增强肿瘤的放射敏感度,。越来越多的学者正在广泛研究其对机体多部位癌变的增殖抑制作用。本研究拟探讨姜黄素、紫杉醇以及姜黄素联合紫杉醇对离体人口腔鳞癌细胞增殖的抑制作用及细胞调亡作用,探索联合用药对人口腔鳞状细胞癌的叠加治疗效应,从而为姜黄素联合紫杉醇治疗人口腔鳞状细胞癌提供实验依据。研究目的探索姜黄素联合紫杉醇在抑制人口腔鳞癌细胞增殖和促进人口腔鳞癌细胞凋亡中的叠加效应。研究方法1.培养CAL27细胞系:复苏人口腔鳞状细胞癌CAL27细胞,进行体外胰酶的消化传代,察看培养后CAL27细胞系的状态和活性,选择处于对数生长期的CAL27细胞作为实验对象。2.观察不同浓度姜黄素或紫杉醇或二者联合用药对CAL27细胞增殖的影响。利用有差异浓度和种类的姜黄素、紫杉醇及二者联合用药作用于CAL27细胞,MTT法检测姜黄素、紫杉醇及联合用药对CAL27细胞增殖活性的影响。3.观察不同浓度姜黄素、紫杉醇和二者联合用药对CAL27细胞调亡的影响。利用有差异浓度和种类的姜黄素、紫杉醇、及二者联结用药作用于CAL27细胞,TUNEL法检测不同组CAL27细胞调亡情况的差异。4.通过Western-blot实验探讨姜黄素、紫杉醇及联合用药对凋亡蛋白分子Bcl-2、Bax和活性caspase-3的表达的影响。研究结果1.人口腔鳞癌细胞培育增殖稳定,呈贴壁生长,形态正常,肿瘤细胞较快增殖,约在培养第2天时达到对数生长期。姜黄素、紫杉醇单用于CAL27细胞时,药物浓度的提高能够强化对鳞癌细胞的增殖抑制作用,表现为浓度依赖性。2.姜黄素或紫杉醇单独作用于CAL27细胞时,细胞的增殖抑制作用随着时间增加而渐进加强,具有一定的时间依赖性。3.MTT实验表明在相同作用时间内,同浓度姜黄素联合紫杉醇相比单独用药能显著抑制CAL27细胞的增殖。4.TUNEL实验表明在相同作用时间内,同浓度姜黄素联合紫杉醇相比单独用药能显著增加CAL27细胞的凋亡数目。5.Western-blot实验表明在相同作用时间内,同浓度姜黄素联合紫杉醇相比单独用药使,Bcl-2蛋白表达明显下调、Bax2蛋白及活性Caspase-3蛋白表达明显上调。结论1.姜黄素或紫杉醇都有抑制CAL27细胞增殖的效应,联合用药具有叠加效应。2.姜黄素或紫杉醇均能诱导CAL27细胞细胞凋亡联合用药具有叠加效应。3.姜黄素或紫杉醇均能下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白及活性Caspase-3蛋白的表达,联合用药作用更加显著,并可以降低蛋白Bcl-2/Bax的比率。