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目的:1、检测染色质组装因子1(Chromatin assembly factor 1,CAF-1)的亚基p60(CHAF1b)在原发性肝细胞癌组织中的表达情况,并分析其表达与临床病理因素(性别、年龄、肿瘤直径、门静脉侵犯、肝硬化、分化程度、TNM分期)的关系。2、通过检测CHAF1b基因RNAi的重组慢病毒对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖、凋亡、细胞周期、细胞克隆能力的影响,初步阐明CHAF1b在肝癌发生、发展中的作用。方法:1、收集经手术切除的110例肝癌组织及相应的癌旁组织(至少距离癌组织1cm),以及20例正常肝组织,采用免疫组化法检测3种组织中CHAF1b的表达情况,并比较分析其表达差异与临床病理因素(性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、门静脉侵犯、肝硬化、TNM分期)的关系。2、采用real-time PCR在mRNA水平检测目的基因(CHAF1b)在各种人肝癌细胞株(SMMC-7721、HepG2、Hep3B、Huh-7)中的表达情况。3、构建针对CHAF1b基因的RNAi慢病毒表达载体并转染入人肝癌细胞株SMMC-7721,分成CHAF1b-RNAi慢病毒组(实验组)和慢病毒空载组(对照组)。4、采用real-time PCR在mRNA水平检测构建的RNAi慢病毒对人肝癌细胞株SMMC-7721中CHAF1b表达的抑制效果;并检测抑制CHAF1b的表达后对细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、细胞克隆形成能力的影响。结果:1、以CHAF1b抗体行HCC、癌旁组织及正常肝组织免疫组织化学染色,细胞核内出现棕黄色颗粒为CHAF1b表达阳性。CHAF1b在HCC、癌旁组织及正常肝组织中的阳性率分别为63.6%(70/110)、3.6%(4/110)、0.0%(0/20),三者之间差异具有统计学意义(P<0.001),其中CHAF1b在肝癌组织中阳性率高于癌旁组织,CHAF1b在肝癌组织中的阳性率高于正常组织,差异均具有统计学意义(P<0.001)。CHAF1b在肝癌组织中的表达与性别、年龄、门静脉侵犯、肝硬化、分化程度及TNM分期无关(P>0.05),与肿瘤直径有关(P<0.05)。2、人肝癌细胞株SMMC-7221中有CHAF1b m RNA显著表达。3、成功构建了针对CHAF1b基因的RNAi慢病毒表达载体,并经PCR和测序鉴定干扰片段的碱基序列及插入位点完全正确。4、构建的RNAi慢病毒感染人肝癌细胞株SMMC-7721后可使CHAF1b mRNA表达量显著下降(P=0.006);Cellomics细胞计数检测细胞生长:实验组细胞的生长明显慢于对照组(P<0.05);FACS细胞周期检测:实验组G1的细胞显著减少(P<0.05),G2/M期与S期细胞显著增多(P<0.05);Annexin V-APC单染法流式细胞仪检测细胞凋亡:实验组发生凋亡的细胞明显高于对照组(P<0.05);细胞克隆形成检测:实验组SMMC-7721细胞集落数目明显低于对照组(P<0.05);MTT法检测细胞增殖:实验组细胞MTT值比值(即增殖倍数)低于对照组(P<0.05)。结论:1.肝癌组织的CHAF1b的表达明显高于癌旁组织及正常肝组织,肝癌组织的CHAF1b的表达情况与性别、年龄、门静脉侵犯、肝硬化、分化程度及TNM分期无关,与肿瘤直径有关。2.人肝癌细胞株SMMC-7721表达CHAF1b。3.构建的针对CHAF1b基因的RNAi慢病毒表达载体能有效抑制CHAF1b基因的表达,干扰CHAF1b基因表达后能显著抑制的人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖能力,促进其凋亡,影响其细胞周期。