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背景阻塞性睡眠呼吸暂停（obstructive sleep apnea,OSA）主要病理特征之一是慢性间歇性低氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）。研究发现OSA与肿瘤进展相关,动物实验与细胞实验表明CIH促进肿瘤进展。我们前期发现CIH促进LLC细胞小鼠皮下成瘤生长,但具体机制未阐明。研究表明CIH激活肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）。血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）是RAS最重要的活性肽,主要通过结合其1型受体（Ang Ⅱ type 1 receptor,AT1R）发挥作用。据此,本课题将通过细胞实验和动物实验探究Ang Ⅱ-AT1R在CIH促进LLC细胞小鼠皮下成瘤生长中的作用及机制。目的本研究旨在探究CIH是否通过Ang Ⅱ-AT1R促进LLC细胞小鼠皮下成瘤生长及其机制,为临床OSA合并肺癌的患者提供新的诊疗思路。方法1.给予小鼠源路易斯肺腺癌（Lewis lung carcinoma,LLC）细胞与SVEC4-10细胞Ang Ⅱ并联合使用AT1R拮抗剂Losartan、PI3K阻断剂LY294002、敲低EGR1处理:A.通过MTT、流式探究Ang Ⅱ-AT1R对细胞增殖影响;B.通过划痕试验探究Ang Ⅱ-AT1R对细胞迁移影响、C.通过小管生成实验探究Ang Ⅱ-AT1R对SVEC4-10细胞成管影响;E.Western blot实验检测上述处理LLC细胞和SVEC4-10细胞中Cyclin D1、p21、Cleaved caspase 9及p-Akt、EGR1的变化。2.给予LLC细胞与SVEC4-10细胞间歇性低氧（IH）处理模拟动物体内慢性间歇性低氧环境并联合使用AT1R拮抗剂Losartan与PI3K阻断剂LY294002和敲低EGR1处理:A.ELISA实验检测细胞培养基上清液中Ang Ⅱ水平;B.MTT实验检测细胞增殖变化;C.划痕实验探究IH对细胞迁移能力的影响;D.a.提取IH处理后的LLC细胞培养基上清液处理SVEC4-10细胞:MTT实验、划痕实验、小管生成实验探究IH是否通过促进LLC细胞分泌Ang Ⅱ提高SVEC4-10细胞增殖与迁移能力进而增强其成管能力;b.提取IH处理后的SVEC4-10细胞培养基上清液处理LLC细胞:MTT实验探究IH是否通过促进SVEC4-10细胞分泌Ang Ⅱ促进LLC细胞增殖;E.Western blot实验检测上述处理后LLC细胞和SVEC4-10细胞中Cyclin D1、p21、Cleaved caspase 9及p-Akt、EGR1的变化。3.将皮下接种LLC细胞的小鼠分别暴露于常氧环境中与CIH环境,给予小鼠生理盐水（NS）,Enalapril（Ena）和Losartan（Los）灌胃处理:分为6组:（1）Con+NS组,（2）Con+Ena组,（3）Con+Los组,（4）CIH+NS组,（5）CIH+Ena组,（6）CIH+Los组:A.测量瘤体与瘤重;B.ELISA检测血清Ang Ⅱ水平;C.免疫组化检测肿瘤组织中Ki67和CD31水平;D.Western blot检测肿瘤组织中Cyclin D1、p21、Cleaved caspase 9及p-Akt、EGR1的变化;E.给予SVEC4-10细胞CIH模型小鼠血清联合使用Losartan、LY294002以及敲低EGR1处理,探究CIH是否通过Ang Ⅱ-AT1R激活PI3K/Akt-EGR1促进小鼠肺癌进展。结果1.Ang Ⅱ通过AT1R激活PI3K/Akt-EGR1上调Cyclin D1,下调p21、Cleaved caspase 9的表达来促进LLC细胞周期并抑制其凋亡从而促进LLC细胞增殖;2.Ang Ⅱ通过AT1R激活PI3K/Akt-EGR1信号通路促进SVEC4-10细胞增殖、迁移从而提高SVEC4-10细胞成管能力;3.IH促进LLC细胞分泌Ang Ⅱ作用于AT1R激活PI3K/Akt-EGR1信号通路上调Cyclin D1,下调p21、Cleaved caspase 9的表达从而促进LLC细胞增殖;4.IH促进LLC细胞分泌Ang Ⅱ作用于AT1R后激活PI3K/Akt-EGR1信号通路促进内皮细胞增殖、迁移从而促进血管生成;5.IH诱导SVEC4-10细胞分泌Ang Ⅱ作用于AT1R后激活PI3K/Akt-EGR1信号通路促进其增殖与迁移;、6.IH诱导SVEC4-10细胞分泌Ang Ⅱ作用于LLC细胞激活AT1R后通过PI3K/Akt-EGR1促进LLC细胞增殖;7.CIH通过Ang Ⅱ-AT1R上调Cyclin D1,下调p21、Cleaved caspase 9的表达促进肺癌细胞增殖,上调VEGFR2的表达促进肿瘤组织血管生成,从而促进LLC细胞小鼠皮下成瘤生长。结论慢性间歇性低氧一方面提高循环系统中Ang Ⅱ水平作用于AT1R,另一方面刺激肺癌细胞和血管内皮细胞局部产生Ang Ⅱ以自分泌或旁分泌途径作用于AT1R;进而激活PI3K/Akt-EGR1信号通路,促进肺癌细胞增殖和血管生成,介导慢性间歇性低氧促进LLC细胞小鼠皮下成瘤生长。