鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP的耐药逆转作用

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目的观察鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP的耐药逆转作用,探讨其对卵巢癌的耐药逆转机制,为鸦胆子油乳的耐药逆转作用应用于临床提供实验依据。方法MTT法测定人卵巢癌亲本细胞株A2780和耐药细胞株A2780/DDP对顺铂和鸦胆子油乳的敏感性,计算细胞生长率=实验组吸光度值/对照组吸光度值×100%,实验重复三遍,取平均值,结果以药物浓度为横坐标、以生长率为纵坐标,通过Excel软件绘制药物浓度-生长率曲线,通过IC50计算软件计算出药物作用48h后50%细胞存活的药物浓度(IC50),耐药指数(RI)=IC50(A2780/DDP)/IC50(A2780)。按照上述方法计算顺铂对两细胞系A2780/DDP及A2780的IC50和RI(未加逆转剂)。同法计算鸦胆子油乳的非毒性剂量IC98。在A2780/DDP中加入浓度为IC98的鸦胆子油乳,培养24h后,接种于96孔板,MTT法测定顺铂对细胞系A2780/DDP的IC50和RI′(加逆转剂)。并计算耐药逆转倍数RI/RI′。FCM检测A2780/DDP凋亡,实验分为四组:空白对照组(空白组)、鸦胆子油乳组(中药组)、顺铂组(西药组)、鸦胆子油乳+顺铂组(中药+西药组),每个组设3个平行样本,于25cm2的培养瓶中接种1×105个细胞。收集各组处理后的细胞进行固定、染色,流式细胞仪检测细胞凋亡,用Multicycle软件进行分析。免疫荧光细胞化学法(按试剂盒说明书操作)检测空白组、鸦胆子油乳组、顺铂组、鸦胆子油乳+顺铂组在药物作用后的A2780/DDP细胞Bcl-2表达变化情况。Western blot法(按试剂盒说明书操作)检测空白组、鸦胆子油乳组、顺铂组、鸦胆子油乳+顺铂组在药物作用后的A2780/DDP细胞MRP表达变化情况。结果1.鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP的生长抑制作用随药物浓度的增加而增强。2.A2780/DDP经0.02g·L-1鸦胆子油乳预处理24h后,其耐药逆转倍数为5.49倍(5.6/1.02)。说明鸦胆子油乳具有逆转卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP耐药的作用。3.空白组、鸦胆子油乳组、顺铂组、鸦胆子油乳+顺铂组在药物作用24h后细胞的凋亡率分别为1.98%、2.11%、3.15%、10.3%,与其它单独组使用药物的耐药细胞相比,鸦胆子油乳+顺铂组耐药细胞凋亡率明显提高。4.免疫荧光化学法检测各组Bcl-2蛋白表达,与其它单独组使用药物的耐药细胞相比,鸦胆子油乳+顺铂组耐药细胞Bcl-2蛋白表达明显降低,结果表明鸦胆子油乳能降低Bcl-2的表达(P<0.05)。5.Western blot法检测各组MRP蛋白表达,与其它单独组使用药物的耐药细胞相比,鸦胆子油乳+顺铂组耐药细胞MRP蛋白表达明显降低,结果表明鸦胆子油乳能降低MRP的表达。结论1.鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP具有耐药逆转作用。2.鸦胆子油乳对人卵巢癌耐药细胞株A2780/DDP的耐药逆转作用的机制可能与其促进耐药细胞的凋亡、下调Bcl-2及MRP蛋白的表达有关。
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