论文部分内容阅读
目的：本实验旨在研究SETDB1在乳腺癌组织及细胞株中的表达情况，探讨其与乳腺癌发生发展及生存预后的关系；若其在乳腺癌中特异性表达，再通过上调和下调SETDB1在乳腺细胞株中的表达，研究其对靶细胞功能学方面的影响。 方法：采用RT-PCR和IHC方法检测SETDB1在38对乳腺癌及癌旁组织中mRNA和蛋白水平的表达；采用IHC组织芯片方法检测150例乳腺癌组织中蛋白表达水平并分析预后情况；采用RT-PCR和WB方法检测SETDB1在14种乳腺细胞株（MCF-7、ZR75-1、T47D、ZR75-30、BT549、SK-BR3、HCC1937、Bcap37、Hs578T、MDA-MB-453、MDA-MB-468、MDA-MB-231、BT474及HBL100，其中HBL-100为乳腺上皮细胞株，余均为乳腺癌细胞株）中的表达情况；利用慢病毒包装和RNAi转染技术在乳腺靶细胞株上高表达和沉默SETDB1，并通过RT-PCR和 WB方法验证干扰后SETDB1在mRNA和蛋白水平的表达；筛选出的高表达和沉默的乳腺克隆细胞株，应用CCK-8实验、克隆形成实验检测其生长增殖能力，Transwell实验检测其迁移和侵袭能力，微球体实验检测其干细胞形成能力，流式细胞术实验检测其细胞周期和细胞凋亡能力；所有统计数据分析应用GraphPad Prism5.0和SPSS16.0软件进行统计，检验水准为P<0.05。 结果： 1.SETDB1在乳腺癌旁及癌组织和细胞株中的表达情况IHC结果显示，38例样本中有23例（60.53％）癌组织，13例（34.21%）癌旁组织SETDB1阳性表达（P<0.05）；RT-PCR检测结果显示，38例乳腺癌与癌旁组织的相对表达量分别为（1.20±0.08、0.96±0.05)（t=2.44，P<0.05）。 2.SETDB1150例乳腺癌组织芯片结果中有92例（61.33%）阳性表达，56例（37.33%）阴性表达，SETDB1的蛋白表达与ER及Ki67的表达具有相关性（P=0.001，P=0.035）；SETDB1的表达可作为乳腺癌独立的预后指标（COX回归，HR=2.633，95%CI=1.189-5.829，P=0.017）。 3.以正常乳腺上皮细胞株HBL-100作对照，RT-PCR检测结果显示，13株乳腺癌细胞株中MCF-7、T47D的表达水平最高（7.86±0.42、6.43±0.12）（P<0.05）；WB结果显示，MCF-7、T47D的相对表达水平较高（2.24±0.08、1.95±0.10）（P<0.05）。 4.以靶细胞的GFP株对照，RT-PCR及WB检测结果均显示，HBL-100的克隆细胞株A1659和Z2656表达水平明显增高（19.28±0.73、22.10±1.23）、（2.38±0.05、6.31±0.38）（P<0.05）；MCF-7克隆细胞株sh2和sh4的表达水平明显降低（0.15±0.02、0.39±0.05）、（0.66±0.02、0.36±0.03）（P<0.05）；T47D的克隆细胞株sh2和sh4的表达水平亦明显降低（0.20±0.01、0.34±0.02）、（0.79±0.04、0.22±0.03）（P<0.05）。 5.高表达SETDB1的细胞株HBL-100的克隆细胞株A1659和Z2656对数生长期细胞增殖数量明显增高，平板克隆形成及软琼脂克隆形成数目增多，细胞周期S+G2/M期增高，细胞的迁移、侵袭和抗凋亡能力增强。 6.沉默SETDB1的细胞株MCF7和T47D的克隆细胞株sh2和sh4对数生长期细胞增殖数量减少，平板克隆形成及软琼脂克隆形成数目减少，细胞周期出现G0/G1期和/或G2/M期阻滞，细胞的迁移、侵袭能力减弱。 结论： 1.SETDB1在乳腺癌组织及细胞株中高表达，可能在乳腺癌发生发展中扮演癌基因角色并影响患者的预后生存情况，有望作为诊断和治疗乳腺癌的一项独立指标。 2.SETDB1可能是肿瘤恶化和复发的危险因素，所以SETDBl有望成为乳腺癌诊断，治疗及预后的分子靶标。