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目的1.构建符合淋巴瘤/白血病生物学特性的高表达miR-17-92 L1210白血病动物模型。2.应用高表达miR-17-92 L1210细胞系及对照L1210细胞系小鼠白血病动物模型,进一步探明各组小鼠对化疗药物的反应,明确miR-17-92与耐药的相关性；观察复方浙贝颗粒改善淋巴瘤白血病化疗反应和逆转化疗耐药的作用。3.观察高表达miR-17-92所导致的肿瘤细胞耐药及抗凋亡作用；复方浙贝颗粒含药血清对高表达miR-17-92 L1210细胞耐药的影响及对促凋亡基因FASL、BAX、FAS表达的影响。4.荟萃分析古代及近现代医家对淋巴瘤病因病机、辨证分型、治法方药的认识,为规范淋巴瘤中医诊疗提供依据。方法1.培养小鼠高表达miR-17-92 L1210系,分别给DBA/2小鼠以尾静脉注射细胞数量100×104/只(A组)、细胞数量300×104/只(B组),皮下注射途径接种右上肢根部细胞数量300×104/只(C组),观察小鼠成瘤情况,分别于接种第8天、第15天、第22天尾静脉取血,计数各组小鼠外周血常规数量并观察白血病细胞形态及比例改变,第22天或濒死前收集小鼠的骨髓细胞,显微镜下行细胞形态学检查,并取肺、脾、肝、肾等脏器及瘤块,制作病理切片,并在光镜下观察细胞形态学改变。2.用小鼠高表达miR-17-92 L1210细胞系,以细胞数量100×104/只尾静脉注射给DBA/2小鼠造模,用拉丁表法将造模成功的小鼠随机分组：miR-17-92观察组、miR-17-92化疗组、miR-17-92中药+化疗组、L1210化疗组、正常对照组。化疗组药物：环磷酰胺用药剂量按80mg·kg-1,0.1ml/10g(即浓度8mg/ml)2天给药1次,连续用药3次；中药组药物：复方浙贝颗粒按成人临床给药剂量的7倍,4g·d-1·kg-1,0.1ml/10g(即浓度0.4g／m1)每天灌胃给药1次,连续用药14天。在实验过程中每7天尾静脉取血检查1次外周血象；于灌胃给药的第15天或濒死前处死动物,取材观察外周血白细胞分类,尤其是外周血白血病细胞比例,骨髓白血病细胞比例,P-gp、脾脏重量等指标。3.用Wistar雄性大鼠8只,制作CZBG中剂量(4g·d-1·kg-1)含药血清。将对数生长期的L1210、高表达miR-17-92 L1210、L1210/CDDP细胞(5×105/m1),分成阿霉素组及复方浙贝颗粒加阿霉素组,阿霉素组分为空白组、低剂量、中剂量、高剂量组；复方浙贝颗粒加阿霉素组分为空白组、低剂量、中剂量、高剂量组,空白组加入空白培养液,其余三组分别加入中剂量复方浙贝颗粒含药血清和低剂量、中剂量、高剂量的阿霉素,培养24、48、72h后,经AnnexinV-FITC/PI双染后,通过流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率及FASL、BAX、FAS阳性细胞率。4.根据淋巴瘤的临床特点,可参见于“石疽”、“阴疽”、“恶核”、“痰核”、“瘰疬”、“失荣”等。应用第5版《中华医典》软件系统和中国知网中文期刊数据库,对战国至清代的1156部古籍及近现代文献,以上述病名为关键词进行检索。按病名、病因病机、辨证分型、治法方药等进行整理及分析,总结古今淋巴瘤中医理论及诊疗。结果1.尾静脉注射组及皮下注射组三组小鼠成瘤率均为100%。尾静脉注射细胞数量100×104组/只(A组)、尾静脉注射细胞数量300×1 04/只(B组)、皮下注射细胞数量300×104/只(C组)平均存活天数分别为：(24.30±3.64)、(14.20±3.42)、(26.40±5.56)d。均于接种第8天尾静脉取血,外周血白细胞计数分别为(9.96±2.03)×109/L、(10.81±1.70)x109/L、(12.76±2.06)×109/L,外周血白血病细胞比例分别为(21.33±2.78)%、(32.17±6.50)%、(10.00±2.00)%。接种第15天外周血白细胞数量分别为(8.07±1.31)×109/L、(5.02±1.22)×109/L、(13.28±2.08)×109/L,外周血白血病细胞比例分别为(32.83±3.50)%、(49.67±7.00)%、(12.66±2.00)%。三组濒死小鼠脾脏均有弥漫性白血病细胞浸润,正常组织结构被破坏；肝脏散在白血病细胞浸润,正常组织结构部分被破坏；肺和肾内有少量白血病细胞浸润,正常组织结构破坏不明显,肺脏有明显出血。2.miR-17-92观察组、miR-17-92化疗组、miR-17-92中药+化疗组、L1210化疗组、正常对照组等五组小鼠均于用药第15天或濒死前处死动物尾静脉取血、留取骨髓液,外周血白细胞数量分别为(7.09±2.93)×109/L. (15.30±11.40)×109/L.(15.31±11.42) ×109/L、(11.47±4.25)×109/L、(11.40±2.58)×109/L,外周血血红蛋白数目分别为(130.33±20.32)、(159.00±13.10)、(145.67±17.07)、(156.17±13.93)、(171.67±13.50),外周血血小板数目分别为(664.17±284.11)×109/L、(1884.17±335.35)×109/L、(1673.17±428.42)×109/L、(1279.67±650.68)×109/L、(973.67±42.70)×109/L,外周血白血病细胞比例分别为(37.17±13.08)%、(5.67±3.93)%、(1.33±0.82)%、(0.83±0.75)%、0.00%,骨髓白血病细胞比例分别为(26.92±10.98)%、(6.83±1.97)%、(3.17±1.03)%、(1.67±1.21)%、0.00%,脾脏重量(g)分别为(0.69±0.18)、(0.19±O.17)、(0.44±0.47)、(0.23±0.19)、(0.60±0.18)，P-gp(ng/ml)分别为(32.68±10.88)、(26.67±10.87)、(31.99±11.25)、(20.31±11.12)、(17.39±2.64)。3.(1)低剂量阿霉素诱导高表达miR-17-92 L1210组较低剂量阿霉素诱导L1210组、低剂量阿霉素诱导L1210/CDDP组24h细胞早期凋亡率、总凋亡率降低,P<0.05,差异有统计学意义。(2)复方浙贝颗粒联合低、中、高剂量阿霉素诱导高表达miR-17-92 L1210组较低、中、高剂量阿霉素诱导高表达miR-17-92 L1210组24h细胞晚期凋亡率、总凋亡率明显升高,P<0.01,差异有显著的统计学意义。复方浙贝颗粒联合低、中、高剂量阿霉素诱导L1210组较低、中、高剂量阿霉素诱导L1210组24h总凋亡率升高,P<0.05,差异有统计学意义。复方浙贝颗粒联合高剂量阿霉素诱导L1210/CDDP组较高剂量阿霉素诱导L1210/CDDP组24h晚期凋亡率、总凋亡率明显升高,P<0.01,差异有显著的统计学意义。(3)低剂量阿霉素处理24h及72h时,高表达miR-17-92 L1210组的FASL. BAX. FAS表达水平明显低于L1210组。复方浙贝颗粒与低剂量阿霉素配伍使用24h,较低剂量阿霉素单独处理高表达miR-17-92 L1210组的FASL.BAX.FAS表达水平明显增高。4.(1)淋巴瘤的病因病机以虚、寒、痰、毒(疫毒)、瘀、滞为多。(2)常用口服方药主要有阳和汤、舒肝溃坚汤、香贝养荣汤、西黄丸、紫元丹等,外用阳和解凝膏,根据证型不同有较多单方验方。(3)复方浙贝颗粒组方中的三味中药,均是淋巴瘤古籍方剂常用药味。“贝母”见于香贝养荣汤、半贝丸、内消瘰疬丸、活血化坚汤、二白散、和荣散坚丸、益气养荣汤, “川芎”见于香贝养荣汤、没药丸、千金内托散、栀子清肝汤、海藻连翘汤、麻菊二陈汤、活血化坚汤、和荣散坚丸、益气养荣汤、补阴八珍汤、阳和解凝膏,“防已”见于内托复煎汤、玄参汤、丹参膏等方剂。这三味中药亦是先人治疗类似淋巴瘤疾患的常用中药,在古籍中大量记载,源远流长。结论1.小鼠尾静脉注射高表达miR-17-92 L1210细胞数量100×104/只所构建的动物模型符合淋巴瘤/白血病的生物学特点,并可满足实验周期。2.高表达miR-17-92可致淋巴瘤白血病小鼠化疗敏感性降低,复方浙贝颗粒可提高化疗缓解率,部分逆转耐药。3.高表达miR-17-92导致肿瘤细胞耐药及抗凋亡；复方浙贝颗粒含药血清对于高表达miR-17-92 L1210细胞系有一定的逆转耐药、促进凋亡的作用。4.淋巴瘤类似病症在中医古籍中有大量记载,其预后转归与淋巴瘤类似。中医药治疗淋巴瘤可以改善病症,复方浙贝颗粒组方有可溯源性。