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目的: 研究3-氢化松苓酸B的降糖活性,进一步研究其降糖机制,为3-氢化松苓酸B应用于糖尿病的治疗提供理论基础。 方法: (1)雄性昆明小鼠高糖高脂饲料饲养8周后,腹腔注射四氧嘧啶建立2型糖尿病小鼠。给予3-氢化松苓酸B后,检测小鼠血糖、胰岛素和胰岛素敏感性指数。 (2)采用计算机辅助药物设计,以B.cereus oligo-1,6-glucosidase为模板构建α-葡萄糖苷酶同源模型,然后将3-氢化松苓酸B与α-葡萄糖苷酶模型进行分子对接,对接复合物再执行1000ps分子动力学计算。 (3)采用酵母来源的α-葡萄糖苷酶,以4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物,测试3-氢化松苓酸B的α-葡萄糖苷酶抑制活性。 (4)采用大鼠小肠来源的麦芽糖酶,以麦芽糖为底物,测试3-氢化松苓酸B的麦芽糖酶抑制活性。 (5)采用大鼠小肠来源的蔗糖酶,以蔗糖为底物,测试3-氢化松苓酸 B的蔗糖酶抑制活性。 (6)雄性昆明小鼠高糖高脂饲料饲养8周后,腹腔注射四氧嘧啶建立Ⅱ型糖尿病小鼠。给予3-氢化松苓酸 B处理4周后,检测小鼠血糖、胰岛素和胰岛素敏感性指数;测定肝、肌糖原含量;采用酶联免疫试剂盒测定小鼠血清 TNF-α、IL-6和CRP含量,小鼠胰腺组织中TNF-α和IL-6含量,肾脏组织中TNF-α和IL-6含量。 结果: (1)与糖尿病小鼠比较,3-氢化松苓酸B高、低剂量组均能够降低糖尿病小鼠血糖(P<0.01),其高剂量组能提高胰岛素敏感性(P<0.05)。 (2)通过计算机辅助药物设计分子对接计算得,3-氢化松苓酸B与α-葡萄糖苷酶模型对接相互作用能为–16.31 kcal/mol,3-氢化松苓酸B与 Asp214有氢键作用(距离2.00(A)),与Tyr71,Phe157,Phe158,Thr215,Phe300和Val303之间有疏水场作用。 (3)通过酵母α-葡萄糖苷酶的抑制试验,3-氢化松苓酸B在20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml浓度下对α-葡萄糖苷酶的抑制率分别为66％、73.3％、80.5％。 (4)通过大鼠小肠麦芽糖酶抑制试验,3-氢化松苓酸在20μg/ml、50μg/ml、(和)100μg/ml浓度下的OD值与对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。 (5)通过大鼠小肠蔗糖酶抑制试验,3-氢化松苓酸在20μg/ml、50μg/ml、100μg/ml浓度下的OD值与对照组比较均无统计学意义(P>0.05)。 (6)与糖尿病小鼠比较,3-氢化松苓酸B高、中、低剂量组均能够降低糖尿病小鼠血糖(P<0.01或 P<0.05),高剂量组能够减少胰岛素的分泌(P<0.05),高、中剂量组能提高胰岛素敏感性(P<0.05);3-氢化松苓酸 B高、中、低剂量组能够提高糖尿病小鼠的肝糖原含量(P<0.01或 P<0.05);3-氢化松苓酸B高、中剂量组小鼠血清 TNF-α含量有下降(P<0.01或 P<0.05),高、中、低剂量组小鼠血清IL-6含量降低(P<0.01),高、中剂量组小鼠血清CRP含量降低(P<0.01或 P<0.05);高、中剂量组小鼠胰腺组织中TNF-α含量降低( P<0.01),高、中剂量组小鼠胰腺组织中IL-6含量降低(P<0.01或 P<0.05);3-氢化松苓酸B高剂量组小鼠肾脏组织中TNF-α含量有降低(P<0.05)。 结论: 3-氢化松苓酸B具有降糖作用,但不是通过抑制α-葡萄糖苷酶活性实现。可能的降糖机制是:通过抑制炎症因子的生成改善胰岛素抵抗,从而提高胰岛素敏感性,发挥降糖作用。对于2型糖尿病小鼠,3-氢化松苓酸 B能够降低血糖,提高胰岛素敏感性,增加肝糖原含量,降低血清TNF-α、IL-6、CRP含量,降低胰腺组织中TNF-α与IL-6的含量,降低肾脏组织中TNF-α含量。提示3-氢化松苓酸B通过抑制炎症因子的生成改善胰岛素抵抗,从而提高胰岛素敏感性,改善肝糖原代谢,增加肝糖原含量,发挥降糖作用。