γ-分泌酶的四个核心亚基及CD147对β-淀粉样蛋白影响的研究

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目的:研究组成γ-分泌酶的PS-1、APH-1、PEN-2和NCT四个核心亚基在HEK293-T细胞中的表达情况,探讨CD147在小鼠胚胎成纤维细胞中超表达对γ分泌酶活性的影响。  方法:体外培养HEK293-T细胞,从中提取全蛋白,蛋白定量后分别用四种蛋白的抗体对其进行western blot分析。提取HEK293-T中的总RNA并反转录出cDNA,以总的cDNA为模版,通过引物经PCR扩增CD147基因,以pMD18-T、pEGFP-N1分别作为克隆载体和表达载体来构建重组载体。以CD147cDNA转染敲除淀粉样前体蛋白表达基因的小鼠胚胎成纤维细胞系,以梯度浓度G418筛选CD147表达量最高的细胞,并提取实验组样本E1、E2及IPE2和对照组样本C1、C2和IPC2中γ分泌酶复合物。蛋白质免疫印迹检测CD147的表达量,酶联免疫吸附分析样品Aβ40和Aβ42的产量。  结果:在HEK293-T细胞中鉴定了γ-分泌酶核心亚基的表达情况。CD147样本E1、E2及IPE2中CD147表达量较相应对照组样本C1、C2和 IPC2分别上升11%(P=0.08),28.2%(P<0.01)及50%(P<0.002),γ分泌酶活性分别下降61.8%(P=0.25),82.9%(P<0.001),90%(P<0.001)。  结论:CD147是γ分泌酶复合物的负调控因子。
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