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人LIGHT(TNFSF14)属于TNF超家族成员，为Ⅱ型跨膜糖蛋白，编码240个氨基酸。原位杂交实验发现人LIGHT定位于19p13.3，与CD27L，4-1BBL，C3相邻。LIGHT与LTB和FasL分别有34％和31％的同源性，而且LIGHT与LTαβ异源三聚体结合同一个受体LTβR，与LTα结合同一个受体HVEM，与FasL结合同一个受体DcR3。LIGHT主要表达在活化T细胞和未成熟DC，其mRNA在脾脏细胞、活化的PBL、CD8~+肿瘤浸润淋巴细胞、粒细胞和单核细胞均有高表达，但不表达于胸腺组织。一些研究结果表明，LIGHT可以促进肿瘤细胞凋亡，也可以促进淋巴细胞细胞活化，这都依赖于靶细胞表达的受体。研究显示，LIGHT是不依赖于CD28的可诱导型表达的共刺激分子，可有效地协同CD3信号促进T细胞的增殖，同时它也可以促进DC成熟，提高DC对抗原的提呈能力；体外实验发现，可溶性LIGHT分子可使一些恶性肿瘤生长减缓甚至可以诱导细胞凋亡。因此，可溶性和膜型LIGHT与其受体形成的信号网络在免疫应答和抗肿瘤免疫中有重要的作用。 1 人LIGHT基因的克隆 采用RT-PCR的方法，从活化T细胞中克隆得到了人LIGHT的cDNA，将其装入克隆载体pMD18-T，得重组载体pMD18-T/LIGHT，酶切、PCR和测序鉴定正确。由此，为人LIGHT基因转染细胞的构建奠定了物质基础。 2 人LIGHT基因转染细胞的构建 通过基因克隆技术，将人LIGHT全长的cDNA片段插入逆转录病毒载体pEGZ-HA-Term。测序正确后，通过脂质体转染技术将重组表达载体(pEGZ-HA-Term/LIGHT)与辅助病毒载体共转染包装细胞293T，用其培养上清感染L929细胞72h后，经Zeocin筛选出稳定表达LIGHT分子的L929细胞株(L929/LIGHT)。经体外长期传代和液氮反复冻存复苏，基因转染细胞生长良好，LIGHT的表达稳定在95％