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目的观测中药蛇六谷提取物对胃癌SGC-7901细胞后的线粒体蛋白质表达的影响,并对差异蛋白进行质谱鉴定,最后通过软件构建差异蛋白质作用的网络,为研究该药抗肿瘤作用的分子机制提供依据。方法①MTT法确定蛇六谷提取物抗胃癌SGC-7901细胞增殖作用的最佳浓度及时间;②流式细胞术检测蛇六谷提取物对SGC-7901细胞凋亡的影响;③双向电泳技术分离得到蛇六谷提取物作用于SGC-7901细胞前后的2-DE图谱,进行MALDI-TOF-MS肽质量指纹图谱测定,并用Western-blot方法进行差异蛋白的验证;④差异蛋白质相互作用的生物信息学IPA网络分析。结果①不同浓度的蛇六谷提取物作用于体外培养胃癌SGC-7901细胞24h后,其抑制增殖作用存在差异,低于150μg/ml蛇六谷提取物对胃癌SGC-7901细胞增殖没有明显的影响,而浓度在200μg/ml以上蛇六谷提取物对细胞增殖有显著性抑制作用(P<0.01),且在24h后有显著性抑制作用(P<0.01);②200μg/ml蛇六谷提取物可以提高细胞早期凋亡率;③双向电泳分离得到背景清晰、分辨率高、重复性好的2-DE图谱,使用Image Master 2D Platinum 6.0软件分析后得到682/643个蛋白质点,以重复性好及两组间差异大于等于2倍作为差异表达蛋白质的标准,共找出20个差异蛋白质点。④指纹图谱分析鉴定后,明确了 200μg/ml蛇六谷提取物处理SGC-7901细胞24h后锌指蛋白、RNA结合蛋白、NADH脱氢酶黄素蛋白、40S核糖体蛋白、促甲状腺激素释放激素水解酶、组蛋白乙酰转移酶、去甲基化酶、延胡索酸水合酶、肽基脯氨酸顺反异构酶表达增加,而烯醇化酶、羟基-CoA脱氢酶、细胞周期蛋白B3、ADP核糖基化因子、热激蛋白GrpE、泛素连接酶CUL7蛋白、Ras相关蛋白、富亮氨酸重复序列蛋白、乳酸脱氢酶表达量下降。⑤蛋白质相互作用网络分析结果显示,上述差异蛋白质可以形成蛋白质互作网络,其主要节点涉及 AKT1,ANKH,ARL15,BLVRB,C6orf106,CDKN1A,CNPY2,CUL7,CUL9,ELAVL1,ENY2,FH,FUNDC2,GRPEL1,HSD17B10,KAT2A,KDM4D,KRT2,LDHB,LUZP1,NDUFV2,OBSL1,PPIL3,RAB39A,RBM45,RPS21,RPSA,SLU7,TRHDE,TRMT10C,UBAP2L,UBC,WDHD1,ZBED5,ZNF562,其中泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme,E2,UBC)位于网络中心。结论第一,蛇六谷提取物能够显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,并促进其早期凋亡。第二,蛇六谷提取物作用胃癌SGC-7901细胞后能影响其线粒体蛋白质表达发生改变,从而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。第三,蛇六谷提取物抑制胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡的蛋白质组学作用机制包括:1、调节线粒体凋亡途径相关蛋白质表达,促进肿瘤细胞凋亡;2、调节参与基因转录调控相关蛋白的表达,维持细胞稳态;3、调节细胞周期调控相关蛋白的表达,抑制细胞周期进程,促进细胞凋亡;4、促进肿瘤细胞内氧化应激反应,诱导细胞凋亡;5、调节细胞内能量代谢,抑制肿瘤细胞增殖。第四,蛇六谷提取物可能通过泛素蛋白酶体途径介导的线粒体凋亡途径促进肿瘤细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。