【摘 要】
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研究目的:探讨微小 RNA-125b(miR-125b)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)增殖及细胞凋亡中的作用。明确miR-125b与候选靶点bcl-2修饰因子(bcl-2 m
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研究目的:探讨微小 RNA-125b(miR-125b)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)增殖及细胞凋亡中的作用。明确miR-125b与候选靶点bcl-2修饰因子(bcl-2 modification factor,BMF)之间的调控关系。探讨miR-125b/BMF途径对食管癌诊断的意义。材料与方法:1.根据研究要求选择66例ESCC癌组织和对应癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-125b在组织中的表达水平,同时结合临床病理资料及预后行相关性分析。2.检测miR-125b在人食管癌细胞109(EC109)和人食管癌细胞9706(EC9706)2种食管癌细胞系及正常食管上皮细胞中的本底表达。3.将合成miR-125b阴性对照(NC)或miR-125b模拟物或相应抑制物转染进入EC109和EC9706食管癌细胞系,用细胞计数Kit-8(CCK8)检测miR-125b模拟物和抑制物转染ESCC细胞系后发生的变化。流式细胞术检测转染后细胞周期和凋亡的变化。4.体外实验验证miR-125b在ESCC中的作用,将EC 109细胞转染miR-125b模拟物及NC并注射到裸鼠中,注意观察它们的变化,定期称重,注意瘤块变化,了解生长状况。根据结果绘制瘤体体积增长曲线和体质量曲线。采用组织学和免疫组织化学法检测裸鼠瘤块体积、重量以及肿瘤组织Ki-67表达等情况。5.通过生物信息学软件Target Scan寻找miR-125b的潜在靶基因。鉴定BMF为候选靶基因。6.使用沉默BMF(si-BMF)转染EC109和EC9706细胞,采用qRT-PCR和western blot检测转染后BMF表达,并用CCK-8检测细胞增殖情况,Western blot分析BMF沉默与细胞凋亡的关系。评估ESCC患者组织和ESCC细胞系中BMF的表达情况,分析miR-125b与BMF水平之间的关系。结果:1.在ESCC癌组织和细胞系中,miR-125b表达显著降低,并且miR-125b的降低与患者淋巴转移明显相关。2.MiR-125b过表达显著抑制细胞生长,诱导细胞凋亡,增加人食管癌细胞109和人食管癌细胞9706细胞周期的G1期。3.过表达miR-125b显著抑制体内肿瘤生长。4.BMF是miR-125b调控人食管癌细胞109和人食管癌细胞9706细胞增殖、凋亡和细胞周期的功能靶点。结论:1.MiR-125b在ESCC中显著下调,具备成为ESCC具有淋巴结转移的诊断潜能。2.MiR-125b通过靶向BMF显著抑制食管鳞癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。
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