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乙型肝炎是一种世界范围的流行性传染病,但目前还没有有效的治疗手段,因此预防是防治乙型肝炎的重点。血源性抗乙肝表面抗原抗体可用于乙型肝炎的被动免疫,防止乙型肝炎的母婴垂直传播。但是,血源性抗体的来源有限且具有潜在的传染性,给它的应用带来限制。开发重组人源性抗HBsAg抗体,可以实现抗体的工程化大规模生产,而且使用安全,可以弥补血源性抗体的缺陷,取代血源性抗体,因此具有良好的社会效益和经济效益。 我们将针对HBsAg preS2区表位的人源性单链抗体基因转入大肠杆菌中表达,表达量可达菌体总蛋白的30%,并且目的蛋白在胞内形成包涵体。经Ni离子金属螯合亲和层析、凝胶层析两步纯化,重组抗体的纯度达到97%。将纯化后的单链抗体进行了复性。在优化复性方法后,在抗体浓度为0.34mg/mL时,蛋白收率可达50%。而且复性后的抗体具有较好HBsAg结合活性,其亲和常数达到0.23×10~8,同时测定了一株鼠源单克隆抗体的亲和常数,结果表明单链抗体的亲和力为一株鼠源单克隆抗体的十六分之一。竞争ELISA的结果表明,我们的单链抗体可以抑制一株鼠源单克隆抗体与HBsAg的结合,抑制率可达40.3%。并建立了测定单链抗体相对比效价的方法。 应用基质辅助激光解析飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization,MALDI-TOF-MS)精确测定了重组单链抗体的分子量,其结果只与理论值相差8道尔顿。同时还用DABITC/PITC双偶合法证实了重组单链抗体的N末端二个氨基酸序列与理论序列一致。另外,用等电点聚焦测定了单链抗体的等电点在7.3-8.1之间。 以上的研究结果表明,我们已构建成功的抗HBsAg单链抗体有望进行大规模生产,从而取代血源性抗体用于乙型肝炎的被动免疫。