目的: 本实验在环磷酰胺所致大鼠POF的不同时期应用补佳乐（戊酸雌二醇），给药后观察大鼠一般状态、性周期变化情况、测量动物体重、卵巢及子宫重量；定期取血测定大鼠体内性激素水平的变化；病理切片HE染色观察大鼠卵巢组织形态及卵泡数目的变化；分析各组实验指标的变化，探讨化疗的同时联合应用补佳乐是否有减轻化疗药物环磷酰胺对大鼠卵巢损伤的作用，为化疗损伤性卵巢早衰的预防提供一定的理论及实验依据。 材料与方法: 本研究选用SPF级2～3月龄雌性Wistar大鼠，通过阴道分泌物涂片光镜下观察性周期，选用有2个正常动情周期的大鼠共85只用于实验。将进入实验的85只大鼠随机分成5组：对照组、CTX组、雌二醇（E2）组、预防组、治疗组，每组17只。①对照组：每天腹腔注射0．9%生理盐水1ml，连续15天。②CTX组：环磷酰胺第1天给予负荷剂量50mg/kg体重，之后14天给予维持剂量8mg/kg体重，环磷酰胺累计剂量为162mg/kg体重。③E2组：补佳乐0．1mg/kg体重，每天灌胃，连续给药15天。④预防组：按CTX组和E2组方案同时联合给药。⑤治疗组：按CTX组给药结束后次日，开始给予补佳乐灌服，连续15日（即3～4个动情周期）。 以上动物均在实验前和实验第7天、15天、30天和45天剪尾静脉各取血1次，检测血清中的性激素（E2、FSH）浓度，比较不同时期大鼠血清性激素水平变化。在实验期间每日阴道分泌物涂片观察动情周期、大鼠一般状态（生命体征，进食情况，大小便，每日测体重1次）。实验第15天、30天和45天分别处死各组大鼠5只，取出子宫及双侧卵巢称取湿重，称重后立即心脏穿刺取血。4%多聚甲醛固定双侧卵巢，常规石蜡包埋，连续5μm切片，HE染色，光镜下观察双侧卵巢组织形态学变化，计数具有正常卵泡结构的卵泡数，分别测定各组大鼠的初级卵泡、生长卵泡、成熟卵泡、总卵泡数。各组剩余的2只大鼠，与Wistar近交系雄性大鼠交配，观察妊娠情况。 结果: 1．各组大鼠性周期的变化： 用药前各大鼠动情周期正常，一般为4～5天，包括动情前期、动情期、动情后期和动情间期。对照组大鼠在整个实验期间动情周期正常，一般为4～6天；CTX组大鼠在用药的第3天开始表现为持续的动情间期，直到实验结束未能恢复正常的动情周期；E2组大鼠在用药后第5天开始表现为动情期延长（3～5天），其中有3只大鼠表现为持续的动情期，在停药后5～6天开始逐渐恢复正常的动情周期；预防组大鼠在用药期间表现为动情周期紊乱，主要表现为动情期与动情间期均延长，在停药后6～8天开始逐渐恢复正常的动情周期，到实验结束预防组大鼠均恢复了正常的动情周期；治疗组大鼠在腹腔注射CTX期间表现为持续的动情间期，在给予补佳乐6天后开始出现动情期，停用补佳乐3天后（即治疗3～4个动情周期停药3天后）又开始表现为持续的动情间期，直到实验结束未恢复正常动情周期。 2．各组大鼠血清性激素的变化： （1）各组大鼠血清E2、FSH行重复测量分析结果示各组E2、FSH分别比较，差异均有统计学意义（F=2361．362，P=0．000；F=2347．925，P=0．000），各时间点E2、FSH分别比较，差异也均有统计学意义（F=854．846，P=0．000；F=578．599，P=0．000），且实验分组和时间有交互作用（F=294．593，P=0．000；F=205．523，P=0．000）。各时间点内，各组间经单向方差分析，结果表明：各组大鼠基础E2浓度和FSH浓度均无显著性差异（F=0．005，P=1．000；F=0．719，P=0．582）。 （2）对照组：对照组大鼠在实验各个时期所测血清中E2、FSH浓度无显著变化，各时间点分别比较差异无统计学意义（F=0．816，P=0．523；F=0．934，P=0．455），表明腹腔注射生理盐水对大鼠卵巢功能没有明显影响。 （3）CTX组大鼠在实验第7天开始至实验结束，血清中FSH浓度持续升高，E2浓度持续下降，与同期对照组、E2组及预防组比较差异均有统计学意义（P<0．05），而与同期治疗组比较差异无统计学意义（P>0．05）。 （4）E2组大鼠在实验第7天、15天所测血清中E2浓度显著高于其余四组，差异均有统计学意义（P<0．05）；在实验第30天、45天E2浓度高于CTX组、治疗组和预防组，且差异有统计学意义（P<0．05），而与对照组比较差异无统计学意义（P>0．05）。FSH浓度在实验第7天、15天与对照组比较，差异无统计学意义（P>0．05），在实验第7天时，血清中FSH浓度与CTX组、治疗组和预防组比较差异无统计学意义（P>0．05），而在实验第15天、30天和45天FSH浓度低于CTX组、治疗组和预防组，差异有统计学意义（P<0．05），与同期对照组比较差异无统计学意义（P>0．05）。 （5）预防组大鼠的血清性激素变化。 （6）治疗组大鼠的血清性激素变化。 3．各组大鼠卵巢及子宫重量的变化： （1）大鼠卵巢重量行析因分析，结果示各组、各时间点大鼠卵巢重量，差异均有统计学意义（F=47．422，P=0．000；F=13．572，P=0．000）；且实验分组和时间有交互作用（F=67．375，P=0．000）。大鼠子宫重量行析因分析，结果示各组、各时间点大鼠子宫重量，差异均有统计学意义（F=69．793，P=0．000；F=120．415，P=0．000）；且实验分组和时间有交互作用（F=17．925，P=0．000）。 （2）对照组和E2组大鼠卵巢、子宫重量在实验期间保持稳定，两组之间比较及组内各时间点分别比较，差异均无统计学意义（P>0．05）。 （3）CTX组和治疗组大鼠在实验第15天、30天和45天，处死后卵巢、子宫重量均持续下降，分别与同期对照组、E2组比较显著减轻，差异均有统计学意义（P<0．05）。 （4）预防组在实验第15天（即停CTX和E2当天），处死的大鼠卵巢、子宫重量分别低于对照组和E2组，比较差异均有统计学意义（P<0．05），但与CTX组和治疗组比较，差异无统计学意义（P>0．05）；在实验第30天和45天，大鼠卵巢和子宫重量仍低于同期对照组和E2组，但高于同期CTX组和治疗组，分别比较差异有统计学意义（P<0．05）。 4．各组大鼠卵泡数量及组织形态学变化： （1）大鼠原始卵泡、初级卵泡、成熟卵泡及卵泡总数行重复测量分析，结果示各组间卵泡数目有显著性差异，F值分别为244．437、173．071、148．278、251．219，P值分别为0．000、0．000、0．000、0．000；各时间点卵泡数目也有显著性差异，F值分别为74．235、65．557、37．152、44．527，P值分别为0．000、0．000、0．000、0．000；且实验分组和时间有交互作用，F值分别为105．421、11．938、85．347、65．743，P值分别为0．000、0．000、0．000、0．000。 （2）CTX组和治疗组在实验第15天、30天、45天，所测卵泡总数及原始卵泡、初级卵泡、成熟卵泡数目持续减少，其中以成熟卵泡数减少最为明显，与同期对照组、E2组分别比较差异均有统计学意义（P<0．05）。光镜下两组各个时期卵巢组织形态学主要表现为：各级卵泡数目及颗粒细胞层次明显减少，间质纤维化、坏死，细胞呈退行性及空泡样改变，体积减小，血管减少，与临床化疗后卵巢早衰病理改变相一致。 （3）预防组在实验第15天卵泡总数及各级卵泡数目均低于对照组和E2组，分别比较差异均有统计学意义（P<0．05），原始卵泡和初级卵泡数目均显著高于CTX组和治疗组，差异有统计学意义（P<0．05），成熟卵泡虽略高于这二组，但经统计学分析无意义（P>0．05）；在实验第30天、45天预防组大鼠原始卵泡和初级卵泡数目趋于稳定，无明显下降，成熟卵泡数目持续增多，卵泡总数及各级卵泡数目均显著高于同期CTX组和治疗组，但仍低于对照组和E2组，分别比较差异均有统计学意义（P<0．05）。光镜下卵巢组织形态学表现为：在实验第15天可见原始卵泡及初级卵泡所占比例增多，少见成熟卵泡，间质纤维化程度较CTX组和治疗组轻，但较对照组和E2组重；实验第30天、45天成熟卵泡数目比例较实验第15天增多，但原始卵泡、初级卵泡及间质纤维化程度无明显变化。 5．各组大鼠妊娠情况： 对照组、E2组、CTX组、预防组和治疗组各剩余2只大鼠，与Wistar近交系雄性大鼠合笼交配，观察2月，最后对照组和E2组2只大鼠均成功分娩出乳鼠，预防组、CTX组、治疗组大鼠均无妊娠。 五、结论: 1．环磷酰胺可损伤大鼠各期卵泡，对发育中的大中卵泡毒性作用更明显，最终使各级卵泡耗竭，卵巢组织纤维化、坏死，从而使E2下降，FSH升高，影响卵巢内分泌功能。 2．在化疗同时联合应用雌激素，保存了较多原始卵泡及中小卵泡，减轻了间质纤维化程度，部分改善了环磷酰胺损伤的卵巢内分泌功能，但可能对生殖功能没有明显改善。其机制可能是由于雌激素抑制了卵巢颗粒细胞凋亡及对下丘脑产生负反馈作用，抑制下丘脑GnRH和垂体促性腺激素的分泌，使卵泡成熟障碍，从而使卵泡对环磷酰胺的敏感性降低。 3．卵巢早衰一旦发生，单纯的雌激素补充治疗，对卵巢功能的恢复无明显改善作用。