【摘 要】
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目的构建人的活性转录因子4(ATF4)基因慢病毒载体并包装慢病毒颗粒(lentivirus),探讨ATF4基因慢病毒修饰对成骨和软骨细胞增殖凋亡的影响；同时对PGRN-/-小鼠骨损伤愈合进行初
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目的构建人的活性转录因子4(ATF4)基因慢病毒载体并包装慢病毒颗粒(lentivirus),探讨ATF4基因慢病毒修饰对成骨和软骨细胞增殖凋亡的影响；同时对PGRN-/-小鼠骨损伤愈合进行初步研究。方法将带有目的基因ATF4的慢病毒载体质粒pWPT-GFP-ATF4与慢病毒包装骨架质粒pSPAX2、pMD2G共同转染293T细胞中,包装成ATF4慢病毒(LV-ATF4);培养C2C12细胞,采用BMP2诱导其向成骨细胞分化,观察LV-ATF4感染对细胞增殖和凋亡的影响；将C3H10细胞进行高密度微团培养,采用BMP2诱导其向软骨细胞分化,分别在BMP2诱导不同时间阶段,检测LV-ATF4对软骨细胞分化中增殖凋亡的影响；手术建立小鼠骨折和骨缺损模型,分析PGRN-/小鼠与野生型小鼠骨损伤后愈合状况及ER Stress相关分子的表达变化。结果成功构建和包装滴度为1×108efu/mL的ATF4重组慢病毒；在BMP2诱导C2C12向成骨细胞分化过程中,感染LV-ATF4能加速细胞的凋亡,抑制细胞增殖和分化；在BMP2诱导C3H10软骨细胞分化过程中,感染LV-ATF4促进细胞的凋亡；成功建立野生型小鼠与PGRN-/-小鼠的骨折和骨缺损模型,与野生型小鼠相比,PGRN-/-小鼠骨损伤后愈合程度下降,ER stress相关分子表达下降。结论ATF4基因过表达可以促进BMP2诱导C2C12成骨细胞分化过程中细胞的凋亡、抑制细胞增殖和分化；同时促进BMP2诱导C3H10软骨细胞分化过程中细胞的凋亡；PGRN可能参与骨损伤后的愈合与骨再生过程。
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