目的构建miR-32-5p及miR-30a基因单敲小鼠模型以及miR-32-5p/miR-30a基因双敲小鼠模型,为进一步探讨miR-32-5p及miR-30a在血管钙化发生发展中的作用提供动物模型。方法1)应用CRISPR/Cas9敲除技术,同时将mmu-mi R-32-5p(鼠源性miR-32-5p)和mmu-miR-30a(鼠源性miR-30a)的single-guide RNA(单导RNA)与Cas9核酸酶的mRNA共同注射到小鼠受精卵中,一次性获得F0代双基因敲除的嵌合子小鼠。2)将F0代miR-32-5p/miR-30a双基因敲除的嵌合子小鼠与野生型C57BL/6小鼠交配以获得F1代miR-32-5p/mi R-30a双基因敲除的杂合子小鼠。3)F1代miR-32-5p/miR-30a双基因敲除的杂合子小鼠互相交配以在F2代及F3代获得miR-32-5p及miR-30a基因单敲纯合子小鼠与mi R-32-5p/miR-30a基因双敲纯合子小鼠。4)所有繁殖的后代小鼠均提取鼠尾DNA经PCR扩增后测序鉴定其基因型。结果1)通过CRISPR/Cas9技术获得16只F0代miR-32-5p/mi R-30a双基因敲除的嵌合子小鼠。2)F1代获得了29只miR-32-5p/miR-30a双基因敲除的杂合子小鼠。并可以继续繁殖后代,每次生产约4~9只,平均存活率72%。3)在F2代及F3代获得了mi R-32-5p及miR-30a基因单敲纯合子小鼠以及miR-32-5p/miR-30a基因双敲纯合子小鼠。结论miR-32-5p与miR-30a基因单敲小鼠和miR-32-5p/miR-30a基因双敲小鼠模型的构建均取得成功,已获得了F2代及F3代的miR-32-5p及miR-30a基因单敲纯合子小鼠以及miR-32-5p/mi R-30a基因双敲纯合子小鼠。