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研究背景： 胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,发病率居恶性肿瘤的第4位,死亡率居第2位,90％以上患者确诊时已是进展期胃癌。研究发现胃癌的发生是一个多基因参与、多阶段累积的复杂过程,肿瘤浸润深度、范围和淋巴结转移是影响患者预后的重要因素。近年来,随着肿瘤免疫学和分子生物学的研究,胃癌侵袭转移的部分分子机制已经清楚,并为胃癌的靶向治疗提供了理论依据;因此,从分子水平探讨胃癌侵袭转移的机制及其对预后的影响,寻找敏感、特异的预测指标,筛选出具有高危侵袭、转移倾向的患者,并加强对其的随访与辅助治疗,对提高胃癌患者的预后具有重要的意义。 热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)是热休克蛋白家族中的一员,具有维持蛋白稳定、促进细胞生长等功能,在细胞生长、发育、分化以及基因转录中发挥重要作用。研究表明,HSP90在多种实体瘤中表达增加,并与肿瘤的发生发展及预后密切相关。亦有研究报道HSP90在胃癌细胞株中表达增加。但关于HSP90在胃癌组织中的表达及其与临床病理因素关系的报道甚少。本课题旨在通过检测胃癌组织中HSP90和与侵袭转移相关的MMP-9蛋白的表达、及HSP90与临床病理因素和MMP-9的相关性分析,探讨HSP90对胃癌侵袭与转移的影响,从而进一步研究HSP90的表达与胃癌患者临床病理因素及预后的关系;同时通过检测HSP90蛋白在新辅助化疗前后的表达情况,探讨化疗对胃癌组织中HSP90蛋白表达的影响。 研究目的： 1、研究胃癌组织中HSP90蛋白的表达情况; 2、探讨HSP90表达对进展期胃癌侵袭转移的影响及其与预后的关系; 3、探讨化疗对胃癌组织中HSP90蛋白表达的影响; 研究方法： 1、病例的筛选及临床、病理资料的收集:连续选择157例于2005年1月至2007年12月期间,在广州医科大学附属肿瘤医院腹部外科手术切除的经病理学确诊的胃癌组织。收集其相关的临床资料,包括肿瘤大小、肿瘤位置、肿瘤分化程度、侵犯深度、淋巴结转移、临床分期、是否复发及复发时间、生存时间等。与此同时选择54例于2010年1月至2011年10月期间,在广州医科大学附属肿瘤医院行病理活检和外科手术切除,并经病理学确诊的匹配的胃癌组织。这54例胃癌患者术前除接受新辅助化疗外,未接受其他治疗。 2、采用免疫组织化疗链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法)检测157例胃癌组织中HSP90和MMP-9蛋白的表达;结果判定标准:每张切片随机选择5个视野,每个视野计数100个细胞,根据肿瘤阳性细胞数的比例分为4组: a.低于5%细胞阳性(0分); b.5%～20%细胞阳性(1分); c.超过20%～50%细胞阳性(2分); d.超过50%细胞阳性(3分)。 按评分高低分级:0～1分定义为低表达,2分或以上为高表达。以上结果由两位病理医师独立阅片并记录。 3、采用SPSS16.0软件进行统计分析。HSP90蛋白表达与临床病理因素的关系采用χ2检验或t检验;生存率应用Kaplan-Meier法计算,单因素分析采用Kaplan-Meier log-rank检验,单因素分析有意义的变量引入Cox回归模型进行多因素分析。P<0.05为显著性检验的标准。 结果： 1、免疫组织化学结果显示:HSP90和MMP-9在胃癌中表达主要定位于细胞浆中,间质细胞中有少量表达;呈不同染色程度的棕黄色颗粒。157例进展期胃癌组织中,HSP90和MMP-9高表达率分别68.2%(107/157)和53.5%(84/157)。 2、HSP90蛋白表达相关的临床病理因素分析显示:在肿瘤直径>5cm(P=0.029)、肿瘤位于上部(P=0.011)、肿瘤浸润T3/T4(P<0.001)、有淋巴结转移(P<0.001)或临床分期III/IV期(P<0.001)的胃癌患者中,HSP90蛋白阳性表达比例增高;但与性别、年龄及分化程度等临床病理因素无明显关系(P>0.05)。进一步将157例进展期胃癌患者以肿瘤浸润深度和有无淋巴结转移各自分成两组,结果提示:HSP90蛋白在肿瘤侵犯(或穿透)浆膜层(T3/T4)(P<0.001)、有淋巴结转移(P<0.001)的胃癌患者中的表达水平增高。 3、胃癌组织中HSP90和MMP-9两者的蛋白表达一致;Spearman等级相关分析结果表明:HSP90表达与MMP-9表达存在正相关(r=0.514,P<0.001)。 4、Cox回归分析提示影响胃癌术后总生存率的因素:HSP90蛋白阴性患者的无瘤生存期和总体生存期优于其阳性表达者(P<0.001,P<0.001)。多因素Cox回归模型显示,HSP90表达量是胃癌患者无瘤生存期和总体生存期的独立危险因素之一。HSP90可作为判断胃癌患者预后的有效分子标志物。 5、HSP90蛋白在胃癌活检组织和手术标本中的阳性率分别为66.7%(36/54)和57.4%(31/54)。但胃癌组织中HSP90蛋白表达在新辅助化疗前后无明显改变,差异无统计学意义(P=0.321)。 结论： 1、胃癌组织中HSP90蛋白表达增高,与侵袭转移相关; 2、HSP90可作为评价胃癌患者预后的有效分子标志物; 3、胃癌组织中HSP90蛋白表达水平在化疗前后无明显改变。