【摘 要】
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赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)是一种对人和动物的生命健康具有强大威胁的真菌毒素之一。在复杂样品中实现对OTA的特异性识别的研究是具有重要的学术价值和实际意义的。分子印迹作为一种具有特异性结合能力的技术,与整体柱结合,所形成的分子印迹整体柱具有特异性好,稳定性强,结合量大和可重复利用等优势。本论文以OTA作为模板分子,创新性的使用了2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸(AMPS)作为功能单
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赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)是一种对人和动物的生命健康具有强大威胁的真菌毒素之一。在复杂样品中实现对OTA的特异性识别的研究是具有重要的学术价值和实际意义的。分子印迹作为一种具有特异性结合能力的技术,与整体柱结合,所形成的分子印迹整体柱具有特异性好,稳定性强,结合量大和可重复利用等优势。本论文以OTA作为模板分子,创新性的使用了2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸(AMPS)作为功能单体,采用了简单高效、快速的“一锅法”结合热引发或光引发聚合的反应,致力于新型的有机-无机杂化分子印迹整体柱的制备,并对其特异性识别能力和色谱性能进行了评价。主要研究内容如下:第一章,文献综述。介绍了OTA的产生源头、毒性、污染情况及其限量标准,概述了目前有关OTA的检测、样品前处理方法、固相萃取吸附剂种类及分子印迹整体柱的研究进展,在此基础上提出了论文的意义和研究方案。第二章,采用“一锅法”,基于自由基聚合反应,AMPS为功能单体,OTA为模板分子,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)和甲基丙烯酸酯取代的多面体低聚倍半硅氧烷(POSS-MA)为交联剂,制备了一种新颖的OTA分子印迹杂化整体柱。系统优化了整体柱的制备条件,考察了所制备的整体柱的形貌特征、特异性识别的能力、结合量、稳定性等性能,探究了整体柱与目标分析物之间的作用机理。结果表明,所制备的整体柱对OTA具有较好的特异性识别能力,在不同浓度竞争干扰物OTB存在的情况下,OTA的回收率在81.8~83.4%之间,OTB的回收率始终保持在3.3%以下。第三章,针对传统的热引发聚合反应时间长、转化率低的问题,通过光引发自由基聚合和“巯基-烯”点击化学反应,在整体柱的制备中引入核酸适配体(Aptamer),在7min内制备核酸适配体-分子印迹(Apt-MIP)双重识别的杂化整体柱。通过利用分子印迹和核酸适配体的双重识别能力,该整体柱对OTA的特异性识别进一步改善。研究了光引发时间、光引发试剂用量和核酸适配体浓度对所制备的整体柱性能的影响。所研制的光引发聚合Apt-MIP整体柱拥有较为均匀的骨架结构,对OTA具有更好的特异性识别能力。其中,在OTA、OTB浓度比为1:1和1:10的混合样品中,OTA的回收率在88.3%以上,同时OTB的回收率保持在2.9%以下,应用于实际啤酒样品中OTA的高特异性富集、分离和检测,OTA的回收率在95.5±1.6%~105.9±1.7%之间(n=3)。
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