【摘 要】
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为了在分子水平上探索蚊虫感染疟原虫后免疫反应的复杂过程,研究人员采用此法结合差异筛选来分离和识别斯氏按蚊感染约氏疟原虫状态下表达增高的基因.该文的主要部分是分离和
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为了在分子水平上探索蚊虫感染疟原虫后免疫反应的复杂过程,研究人员采用此法结合差异筛选来分离和识别斯氏按蚊感染约氏疟原虫状态下表达增高的基因.该文的主要部分是分离和克隆蚊虫对疟原虫感染的反应性基因.将吸血后24小时的mRNA用作SSH,以吸感染血外加感染血为Tester(T)组,吸正常血外加感染血为Driver(D)组.按照SSH原理,消减杂交后感染组表达增高基因的cDNA(差异产物)被富集,将此差异产物与T-载体连接转化后得到59个克隆.以初始T组和D组cDNAs制备混合探针,点杂交比较59个克隆的表达差异,筛选得到其中24(阳性率为41﹪)个T组信号强于D组.3个克隆的模拟Northern杂交和另外6个克隆的RT-PCR表达动态检测,结果显示这些基因在感染后1~14天内表达有不同程度的提高.通过RACE-PCR得到5个基因的3-末端,2个基因的5-末端,其中1个(Dpl)可能已是全长.从已知功能基因提供的信息,该研究发现的斯氏按蚊对约氏疟原虫反应性表达增高基因包括以下5类:(1)DNA结合蛋白,如AsTFIID<,42>;(2)参与信号转导的蛋白,如AsUCTE,在昆虫Toll受体介导的信号途径中起到降解IkB的作用;(3)参与能量代谢的酶,如AsANT和AsNDK;(4)蛋白酶和肽酶类,如AsASP、AsASDP和AsCHYM2,参与细胞内选择性降解,与细胞吞噬、塑形和运动等有关;(5)参与诸如DNA复制和蛋白合成等细胞基本活动的蛋白,如AsEF-Tu和AsDNARFMcm7.
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