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第一部分大鼠局灶性脑缺血后NR2B、endo G的表达变化目的:观察N-甲基-D天冬氨酸受体亚单位蛋白NR2B和细胞凋亡诱导因子核酸内切酶G(endonuclease G,endo G)在大鼠局灶性脑缺血再灌注时脑基底节区的表达变化,及脑梗死体积和神经细胞凋亡数的变化规律。探讨脑缺血再灌注后神经细胞的损伤机制。方法:将63只体重为250～300克健康雄性成年Wistar大鼠,随机分成正常组(A)、假手术组(B)、脑缺血1h再灌注组(C),选择“栓线法”大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,用免疫组化和图像分析方法观察局灶性脑缺血1小时再灌注1、6、24及72h后基底节区NR2B和endo G的表达,TTC法测定脑梗死体积,TUNEL法测定神经细胞凋亡数。结果:脑缺血再灌注可引起缺血区神经细胞坏死或凋亡,梗死体积较正常组与假手术组明显增多,凋亡细胞数于再灌注24h时达高峰,且出现于细胞坏死区周围,这于endo G的阳性表达规律几乎是一致的:缺血/再灌注1h,NR2B受体的阳性表达降低,随着脑缺血/再灌注时间的延长,NR2B的阳性表达又逐渐升高,于再灌注6h时达高峰,尔后急剧下降,持续至72h之后;缺血/再灌注1h,endo G蛋白的阳性表达开始升高,随着脑缺血/再灌注时间的延长,NR2B的阳性表达又逐渐升高,于再灌注24h时达高峰,尔后逐渐下降,持续至72h之后。结论:NR2B在缺血性脑损伤中的表达在缺血早期的表现为减少—增多—再减少的动态变化过程;endo G的表达为在缺血早期是升高的,随后急剧降低,表达规律均呈时间依赖性。脑缺血再灌注可引起缺血区神经细胞坏死或凋亡。第二部分酒石酸艾芬地尔、人参皂甙-Rd及其联合应用对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响目的探讨酒石酸艾芬地尔、人参皂甙-Rd及其联合应用的神经保护作用。方法健康雄性成年Wistar大鼠117只,随机分为正常组、模型组、酒石酸艾芬地尔组、人参皂甙-Rd组及联合用药组。酒石酸艾芬地尔组以酒石酸艾芬地尔2mg/Kg,配制成适当浓度溶液;人参皂甙-Rd组以人参皂甙-Rd 2mag/Kg,临用时配制成适当浓度溶液;联合用药组同时给予上述两种药物干预治疗。腹腔注射给药,1次/日,连续3天,第4天造模,造模成功并经评分入组后继续干预治疗,在脑缺血1h再灌注1h、6h、24h、72h处死取材,检测比较各组大鼠神经功能缺失评分、脑梗死比、HE染色、神经细胞凋亡数及免疫组化NR2B、endo G的表达变化。结果1)神经功能缺损评分:与模型组相比,在再灌注24h时,人参皂甙-Rd组评分差异有统计学意义(P＜0.05),联合用药组评分差异有显著性意义(P＜0.01);其它时间点药物组与模型组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。2)再灌注24h时脑梗死比变化,药物组的梗死比与对照组比较,有显著性差异(P＜0.01)。3)与模型组相比,用药组在脑缺血再灌注6h、24h、72h可显著降低凋亡神经细胞的阳性表达(P＜0.01),药物组组间比较,联合用药组可显著降低凋亡神经细胞数(P＜0.01)。4)HE染色:药物组与对照组相比,模型组神经细胞明显减少,残存神经细胞胞体缩小变形,核固缩、深染,核仁、异染色质消失,间质水肿明显。药物干预组多数神经元结构较完整,形态相对正常,间质水肿轻。5)对NR2B表达的影响:与模型组比较,于再灌注6h,单纯用药组和联合用药组均可显著降低缺血再灌注大鼠基底节缺血损伤区NR2B蛋白的阳性表达(P＜0.01),但联合用药组比单纯用药组降低的更明显。7)对endo G表达的影响:与模型组相比,于缺血再灌注6h、24h、72h,单纯用药组与联合用药组均可降低endoG的阳性表达,差别有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),而联合用药组比单纯用药组的作用更明显。结论1.酒石酸艾芬地尔和人参皂甙-Rd可以减少神经细胞凋亡、缩小脑梗死体积、改善神经功能的缺失,具有脑保护作用。2.酒石酸艾芬地尔和人参皂甙-Rd可以减少NR2B与endo G的阳性表达,从而在不同环节阻断神经细胞坏死与凋亡。3.酒石酸艾芬地尔和人参皂甙-Rd联合应用时可以产生协同作用,显著缩小脑梗死体积,对脑神经损伤起重要的保护作用。