大鳞副泥鳅是东亚地区近几年养殖需求非常高的水产养殖品种之一,其营养价值和药用价值都非常可观,市场潜力巨大。本文在借鉴前人的研究基础上,对大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)早期发育阶段的生长模式、核酸含量变化、消化酶活性变化及骨骼畸形及其耐氨机制进行了相关研究,主要研究结果如下:(1)大鳞副泥鳅早期发育阶段的生长模式以初孵至60日龄(DAH)大鳞副泥鳅仔鱼作为实验材料,评价了大鳞副泥鳅早期阶段体重体长关系以及身体各部分异速生长模式。结果发现,大鳞副泥鳅仔鱼阶段最为适合的体重体长关系为指数模型,BW=0.025×TL2.649(R2=0.996)。大鳞副泥鳅仔鱼头长、头高、躯干长、尾长及眼径在早期阶段均表现为正异速生长,而体高、尾柄高、尾鳍长、胸鳍长及须长在早期阶段则表现为负异速生长。随后,大鳞副泥鳅仔鱼身体各部分又表现出相似的异速生长模式,均向着等速生长逐渐变化。结果说明大鳞副泥鳅早期发育阶段身体各部分异速生长的发育顺序遵循对提高存活率的重要性。(2)大鳞副泥鳅早期发育阶段核酸及蛋白的变化测定了大鳞副泥鳅从孵化至60 DAH期间核酸及蛋白质含量以评价其早期阶段的生长。以紫外分分光光度法测定大鳞副泥鳅仔稚鱼的核酸含量(n=3,养殖温度24.4±0.4℃,溶解氧7.1±0.5 mg L-1,p H 7.9±0.4)。结果发现核糖核酸(RNA)含量在2-5 DAH期间显著下降,在5-10 DAH之间快速上升,随后持续降低,直至试验结束。脱氧核糖核酸(DNA)含量也在2-5 DAH期间上升,在5-9 DAH期间下降,随后表现为缓慢上升,直至26 DAH,随后降低至一个相对较为稳定的水平直至试验结束。RNA-DNA比和protein-DNA比均与生长速率表现出明显的相关性,大鳞副泥鳅早期发育阶段RNA-DNA比与生长速率之间表现为明显的正相关关系。结果表明大鳞副泥鳅早期发育阶段细胞水平上的生长模式为从孵化到卵黄囊耗尽主要表现为细胞数量的增生,初次摄食之后则是细胞体积、质量的增大。此外,大鳞副泥鳅早期发育阶段的关键期应在17 DAH之前。(3)大鳞副泥鳅早期发育阶段消化酶活力的变化研究了从孵化至40 DAH期间大鳞副泥鳅仔稚鱼不同胰酶(胰蛋白酶,糜蛋白酶,淀粉酶及脂肪酶)、胃酶(胃蛋白酶)及肠酶(碱性磷酸酶及亮氨酸氨基肽酶)的比活力和总活力以评价其早期阶段的消化生理。大鳞副泥鳅仔鱼养殖温度为24.4±0.4℃,在初次摄食(4 DAH)至15 DAH期间投喂轮虫,10-35 DAH期间投喂小型枝角类,30-40 DAH期间投喂人工配合饲料。胰蛋白酶、糜蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性在仔鱼孵化当天即可检出,说明这些消化酶是受基因调控的。多数胰酶活性均在20 DAH之前增加,而在随后开始降低。大鳞副泥鳅仔鱼胃蛋白酶在30 DAH时开始检出,表明了其消化系统中功能性胃腺的出现。碱性磷酸酶也在仔鱼孵化时即可检出,随后快速上升,并在20 DAH时达到第二个峰值。而亮氨酸氨基肽酶活性在整个试验过程中均表现为逐渐上升的趋势。因此,大鳞副泥鳅仔鱼在外源性营养开始之前就有一个功能性的消化系统,而且其消化能力随着个体发育而增加。肠酶活力在10-20 DAH之间的显著增加意味着大鳞副泥鳅成鱼消化模式的开端。30DAH之后胃蛋白酶活力的显著上升,标志着大鳞副泥鳅仔鱼由碱性消化方式向酸性消化方式的转变,而这一时期是大鳞副泥鳅仔鱼转食人工配合饲料的适当时机。(4)大鳞副泥鳅早期阶段骨骼畸形的研究采用硬骨-软骨双染色法研究了从孵化至60 DAH期间大鳞副泥鳅仔稚鱼骨骼畸形的发生。结果发现大鳞副泥鳅早期阶段骨骼畸形发生的部位主要在脊椎骨的4个分区,以及背鳍、臀鳍和尾鳍,共观察到14种骨骼畸形类型。大鳞副泥鳅仔稚鱼不同时期骨骼畸形分布不同,本试验中未发现脊椎骨畸形,神经棘畸形在阶段A(TL<12 mm)出现频率最低,在阶段D(TL>50 mm)出现率最高;脉棘畸形在阶段B(TL 12-30 mm)出现频率最低,在阶段C(TL 30-50 mm)出现频率最高;鳍畸形在阶段C(TL 30-50 mm)出现频率最低,在阶段B(TL 12-30 mm)出现频率最高。大鳞副泥鳅常见的畸形类型包括鳍条骨畸形、神经棘及脉棘畸形等。仔稚鱼骨骼畸形的高发可能与其机体的剧烈生理变化以及内脏器官的增殖、分化相关。鳍条畸形、神经棘分叉和脉棘融合出现的频率最高,说明了这些组织最易受到环境变化的影响。直至试验结束仍未观察到脊柱骨畸形,证明大鳞副泥鳅脊柱畸形的发生时期比较晚(60DAH之后)。(5)空气和氨氮暴露下大鳞副泥鳅体内氨的累积将大鳞副泥鳅暴露于30 mmol L-1 NH4Cl溶液和空气中,以研究其在氨氮和空气暴露条件下体组织中氨、尿素含量以及谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性的变化。研究发现30 mmol L-1 NH4Cl溶液暴露下,随着暴露时间的增加,大鳞副泥鳅血浆和脑组织中氨含量显著增加;肝脏组织和肌肉组织中氨含量随着暴露时间的延长在前24 h内表现为少量的增加,而在暴露48 h后则显著上升。空气暴露下,随着空气暴露时间的延长,大鳞副泥鳅血浆、脑组织、肝脏组织和肌肉组织中氨含量在前24 h内表现为少量的增加,而在暴露48 h后则显著上升,血浆、脑、肝脏和肌肉中氨含量分别上升为对照组的2.2倍、3.3倍、2.5倍和2.9倍。大鳞副泥鳅无论暴露于30 mmol L-1 NH4Cl溶液或者空气中,不同暴露时间对其血浆、肝脏组织和肌肉组织中尿素含量的影响均非常的小,其体内尿素含量在氨氮和空气暴露下一直处于较为稳定的水平,不受机体氨累积的影响。大鳞副泥鳅暴露于30 mmol L-1的NH4Cl溶液中,暴露时间对其血浆中谷丙转氨酶活性的影响是很小的。而暴露于空气中时,暴露时间显著影响其血浆中谷丙转氨酶活性(P<0.05),空气暴露48 h后,其血浆中谷丙转氨酶活性显著升高。然而,无论是暴露于30 mmol L-1的NH4Cl溶液中还是暴露于空气中,大鳞副泥鳅血浆谷草转氨酶活性及肝脏组织中谷丙转氨酶、谷草转氨酶均不受暴露时间的影响。结果表明说明大鳞副泥鳅组织和细胞具有很高的氨耐受性,也可能具有以NH3形式挥发部分体内氨以达到应对氨氮毒性的机制。大鳞副泥鳅无论暴露于30 mmol L-1 NH4Cl溶液或者空气中,不同暴露时间对其血浆、肝脏组织和肌肉组织中尿素含量的影响均非常的小,说明大鳞副泥鳅并不是以合成尿素作为其主要的氨解毒策略。通过大鳞副泥鳅血浆中谷丙转氨酶活性的显著升高,可推测其在空气暴露下可能会通过部分氨基酸代谢生成丙氨酸以应对体内高浓度的氨累积。(6)谷氨酰胺在大鳞副泥鳅应对氨氮和空气暴露中的作用将大鳞副泥鳅暴露于30 mmol L-1 NH4Cl溶液和空气中,以研究其在氨氮和空气暴露条件下体组织中谷氨酰胺含量以及谷氨酰胺合成酶和谷氨酸脱氢酶活力的变化。研究发现大鳞副泥鳅暴露于30 mmol L-1 NH4Cl溶液和空气,随着暴露时间的延长,大鳞副泥鳅肝脏和肌肉组织中的谷氨酰胺含量有明显累积的趋势,脑、肝脏和肠道组织中谷氨酰胺合成酶活性均显著上升,说明了大鳞副泥鳅可通过体组织中累积谷氨酰胺来应对体内氨浓度的上升,其可刺激体内谷氨酰胺的合成,将氨转化为无毒性的谷氨酰胺。30 mmol L-1 NH4Cl溶液和空气暴露显著影响大鳞副泥鳅脑和肠道组织中谷氨酸脱氢酶活性,但对肝脏组织中谷氨酸脱氢酶活性并没有显著性影响。肠道中谷氨酸脱氢酶活性显著上升,可能其在鱼类应对氨氮毒性中起到了比肠道谷氨酰胺合成酶更加重要的作用。而大鳞副泥鳅肝脏组织中谷氨酸脱氢酶活性并不受氨氮和空气暴露的影响,这可能是由于肝脏组织中转氨酶催化生成了足量的谷氨酸。(7)氨氮和空气暴露下大鳞副泥鳅体表碱化及氨气挥发为确定大鳞副泥鳅是否具有以NH3形式排泄体内氨的能力,设计了氨氮暴露和空气暴露两组试验。结果发现,大鳞副泥鳅在NH4Cl溶液中暴露24 h后,试验组产生氨的量显著高于对照组。空气暴露导致大鳞副泥鳅NH3挥发量的显著提高。试验结果说明大鳞副泥鳅在氨氮和空气暴露下能够以NH3形式排泄体内过量的氨。大鳞副泥鳅NH3挥发量随着暴露时间和温度的增加而升高。空气和氨氮暴露致使大鳞副泥鳅后肠壁明显碱化,说明后肠是其挥发NH3的位点之一。皮肤在空气暴露下也呈现明显的碱化,说明其也可能是一个NH3挥发位点。简而言之,本研究结果表明了大鳞副泥鳅在氨氮和空气暴露下可以气态形式挥发30-40%左右的氨,且高温促进了NH3的挥发。后肠和皮肤的碱化意示着其两个NH3挥发位点。